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背景和目的皮肤癌是世界六大常见癌症之一,其中常见的两种病理分型分别为皮肤鳞癌(squamous cell carcinoma,SCC和基底细胞癌(basal cell carcinoma, BCC)。近年来,皮肤癌的发病呈现逐年增加的趋势,其较强的转移与侵袭性是造成有机体病死的主要原因。皮肤癌和银屑病有一些相似的病理特点,例如表皮增生过度、表皮角化不全等。其中皮肤组织中的一些特异性的分子标记如后期角质化包膜蛋白(late cornified envelope 3C, LCE3C)在银屑病病人中被发现表达是增高的,后期角质化包膜蛋白属于角质化包膜蛋白家族,由LCE基因编码,在正常皮肤中,LCE3C呈现低表达,当皮肤发生表皮破损与组织炎症时,LCE3C被诱导表达,LCE3C是表达在胞外的一种粘附分子,在表皮中主要发挥表皮屏障保护作用。另一种和表皮层细胞分化相关的标记分子GRHL3 (grainyhead-like 3)在表皮的新陈代谢过程中可以促进表皮基底层细胞的迁移,GRHL3是一个转录因子,又称为Get1,在表皮屏障中可以促进表皮基底层细胞的迁移,在表皮的正常分化过程中,基底层细胞会由先前的未分化状态逐渐发展成熟,GRHL3在这一过程中可以促进表皮基底层细胞特异性基因的表达。因此研究GRHL3在皮肤鳞癌细胞系中的表达变化将有助于我们分析LCE3C对皮肤癌的发病机制中扮演的作用,为了探讨LCE3C蛋白在皮肤鳞状细胞癌以及基底细胞癌中的分布及其调控的分子机制,分别从组织水平和细胞水平分析LCE3C的组织分布和与其相关的转录因子GRHL3的表达变化及其与细胞增殖与划痕愈合能力的影响。方法1.利用HE染色分析皮肤鳞癌、基底细胞癌与正常皮肤组织形态方面的差异。2.利用免疫组织化学法检测LCE3C在银屑病、皮肤鳞癌、基底细胞癌组织中的表达,正常人皮肤组织做对照。3.根据Genbank提供的人LCE3C基因mRNA的序列(Genbank序列号：NM 178434.2),利用Primer 5.0软件,设计引物,用基因工程的方法构建绿色荧光蛋白融合表达的LCE3C重组表达载体pLCE3C-GFP。4.将重组表达载体pLCE3C-GFP、pGFP分别转染人皮肤鳞癌细胞系A431,用激光共聚焦显微术分析LCE3C在A431细胞中的定位。5.Western blot方法检测转录因子GRHL3对LCE3C表达的影响。6.MTT实验检测LCE3C对A431细胞增殖能力的影响。7.划痕愈合实验检测LCE3C对A431细胞在划痕处的愈合能力的影响。结果1.HE染色结果显示,和正常人皮肤组织相比,皮肤鳞癌和基底细胞癌的表皮层分层情况严重紊乱,分层界限不明显,且基底层、棘层有明显增厚的迹象。2.免疫组化结果显示,相比于正常人皮肤组织,LCE3C在SCC和BCC组织中LCE3C表达明显增加,在皮肤癌组织中LCE3C主要分布在表皮的角质层,且主要表达分布在细胞核外。3.激光共聚焦结果显示,LCE3C主要表达分布在细胞核外。4.Western blot结果显示,与角质形成细胞(HaCaT)相比,A431细胞中GRHL3表达量显著降低,而LCE3C 表达量明显增高；过量表达GRHL3的细胞(A431/GRHL3) LCE3C表达量显著降低。5.MTT结果显示,相比于正常未转基因的A431细胞,过量表达LCE3C的A431/LCE3C-GFP细胞在12 h、24 h、48 h三个时间点的细胞相对增殖率均低于A431细胞。6.划痕愈合实验结果显示,和正常未转基因的A431细胞相比,过量表达LCE3C 的 A431/LCE3C-GFP细胞在划痕处的愈合能力明显降低。结论1.与正常人皮肤组织相比,LCE3C在皮肤癌中的表达增加,主要分布在皮肤角质层的细胞核外；2.转录因子GRHL3和LCE3C的表达在皮肤癌细胞系A431细胞中表现为负相关；3.LCE3C在一定程度上可能抑制A431细胞的增殖与划痕愈合能力。