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异种器官移植成为解决器官短缺的有效途径正受到越来越多的关注。然而免疫排斥反应,特别是超急性排斥反应(hyperacute rejection,HAR)很大程度上制约了它的发展。补体系统激活是异种器官移植超急性排斥反应发生的主要原因,抑制受体的补体系统就可以阻止超急性排斥反应的发生。膜补体调节蛋白衰变加速因子(decay accelerating factor,DAF),膜辅蛋白(membrane cofactor protein,MCP)和保护素(protectin,CD59)是补体系统中具有明显的同种限制作用的3种补体下调因子,在补体攻击时能提供区分“自我”与“非我”的方式,保护宿主细胞不受同源性补体的伤害,从而延长移植物的存活时间,克服超急性排斥反应的发生,在异种器官移植方面有重大的应用价值。因此人补体调节蛋白(complement regulator proteins,CRPs)是目前异种移植界的研究热点之一。 本研究根据文献报道的衰变加速因子DAF cDNA的序列,设计并合成特异引物,以中国人胚胎mRNA为模板,采用RT-PCR方法扩增出1684 bpDAF cDNA。序列分析表明,该cDNA含DAF全长编码区,共编码381个氨基酸,没有编码Alu家族的序列,为GPI锚连型DAF。 将DAF全长cDNA序列插入真核表达载体pcDNA3,成功地构建了重组真核表达载体pcDNA3-DAF,以磷酸钙沉淀法转染NIH/3T3细胞,用G418筛选获得NIH/3T3DAF,PCR实验结果显示DAF基因整合在转化的NIH/3T3细胞的染色体上,RT-PCR和Western印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白DAF在NIH/3T3DAF细胞系中获得表达。检测连续传代30次NIH/3T3DAF结果表明人补体调节蛋白基因DAF仍稳定整合并高效表达,并未随着传代而丢失,以上结果显