本研究以福建省27份橄榄遗传资源为材料,摸索出适合橄榄叶片基因组DNA的提取方法:建立和优化了橄榄RAPD反应体系;筛选出具有品种(或单株)特异性的RAPD标记;采用RAPD标记,结合聚类分析,进行了福建省橄榄遗传资源的亲缘关系与遗传多样性研究。主要研究结果如下: 一、叶片DNA提取方法的建立。针对橄榄叶片富含多酚类、多糖、色素等物质,易与DNA结合成复合物,难溶解,又易抑制Taq酶活性,从而影响PCR扩增。本研究参考Dllaporta, Wood和Hichs方法,加以改进。以新鲜幼嫩的橄榄叶片为材料,同时又在提取液中加入3%PVP,有效地克服了酚类物质的干扰,从橄榄叶片中提取了较高纯度和产量的DNA,适宜作为橄榄的RAPD分析。 二、橄榄RAPD反应体系的优化,在参考其他RAPD分析反应程序的基础上,经过优化试验,确定适宜的PCR扩增程序为:94℃,预变性4min;94℃变性1min,38℃退火1.5min;72℃延伸2min,45个循环;最后一个循环72℃延伸10min。优化的橄榄RAPD反应体系为:在扩增反应总体积25μl中,包含dNTP 0.2mmol, Buffer2.5μl。引物10ppm,DNA模板25ng,Taq酶1U。 三、橄榄RAPD标记的多态性程度分析。采用16个具特异扩增的多态性引物对福建省27份橄榄基因型进行扩增。16个引物,在27份供试材料中共扩增出202个位点,且多态性达99.5%,平均每个引物扩增12.63个位点。各供试材料之间的遗传距离范围为0-1。 四、品种(或单株)特异性RAPD标记的筛选与品种鉴别。采用16个具特异扩增的多态性引物对所有供试材料进行扩增,获得了14个引物对27份材料扩增的RAPD特征标记37个,13个引物的共享特征标记23个。 五、福建橄榄遗传资源的RAPD标记的聚类分析。采用欧几里德距离法和欧氏距离法进行聚类分析都可将这27份福建橄榄遗传资源划分为闽江橄榄和平和橄榄及其他类型。