黑色素瘤抗原基因A家族（MAGEA）在多种肿瘤以及男性睾丸中高表达,在正常细胞中低表达或不表达,该蛋白家族近年来已成为抗肿瘤药物和免疫治疗研究的热门抗原。前期,本人所在课题组发现在食管癌中MAGEA6普遍高表达,而正常组织不表达。且相关研究也证实在许多肿瘤的中都发现了MAGEA6的表达水平升高,目前关于MAGEA家族中MAGEA6功能及作用机制的研究相对较少。本研究围绕MAGEA6功能及发挥功能时相互作用的蛋白开展研究,筛选出了与其密切相关的基因MSMO1,并深入探讨其与MAGEA6的相互作用机制。研究将为MAGEA6高表达肿瘤的防控提供更多资料支持。课题通过以下几个部分展开研究:实验室前期已构建好一个高表达MAGEA6的Eca109稳定细胞株,将此细胞株进行转录组测序得到了一个高通量测序数据,为获得MAGEA6高表达时,与其功能发生密切相关的基因。首先对此数据进行生物信息学分析,将MAGEA6高表达前后的测序数据进行评估和排序,过滤除去低质量的数据,将高质量的clean reads与参考基因组进行比对,不能直接与参考基因对齐的测序数据作为差异基因数据。将数据进行筛选后输入到David数据库中,获得GO富集分析和KEGG通路富集分析的数据,这些富集基因的分子功能和生物学过程与RNA聚合酶II密切相关。实验中发现通过高通量测序数据得到与MAGEA6上调后表达明显的5个上调显著差异基因和8个下调显著差异基因。将STRING中MAGEA6的数据下载导入Cytoscape（v3.5.1）中进行PPI蛋白网络的构建筛选出与MAGEA6相关的13个核心调控基因。通过差异基因筛选和蛋白互作网络的构建,发现MSMO1同时是MAGEA6上调后的显著差异基因和核心调控基因,且MSMO1也与RNA聚合酶II的调控有关,因此我们推测二者关系密切。为了阐明MAGEA6与MSMO1的相互作用关系,分别将高表达MAGEA6的Eca109细胞（Eca109-MAGEA6-3.1）、对照Eca109细胞（Eca109-3.1）以及低表达MAGEA6的Eca109细胞（Eca109-MAGEA6-si RNA）研究比较,分别利用q RT-PCR、Western blot、细胞迁移、侵袭以及CCK8细胞增殖实验进行分析研究,结果发现食管癌细胞中高表达MAGEA6可以使其生长速度变快,细胞活力变强,侵袭能力增强。将高表达Eca109的细胞（Eca109-MAGEA6-3.1）与敲低MSMO1的Eca109细胞（Eca109-MAGEA6-si MSMO1）做比较,通过q RT-PCR、Western blot、细胞迁移、侵袭以及CCK8细胞增殖实验中发现,改变MSMO1的水平并不会使细胞在这些水平上出现显著性差异。而当高表达与敲低MAGEA6时,MSMO1的表达也相应增加与减少,这提示MAGEA6正向调控MSMO1的表达,二者可能会协同促进细胞的癌变过程。为了探讨与MAGEA6表达调控相关的功能复合体蛋白,构建筛选高表达MAGEA6基因（携带V5融合基因标签）的Eca109细胞。用特异性连接V5的磁珠拖拽与MAGEA6相互作用蛋白。通过免疫共沉淀结合质谱分析,发现MSMO1与MAGEA6是间接的相互作用关系。并且发现了与MAGEA6有可能形成功能复合体的三个蛋白L10K,RS10L以及CHTOP。本研究明确了MAGEA6的主要功能,筛选并验证MAGEA6表达调控相关蛋白,发现与其功能相关最密切的基因MSMO1,随后证明了MAGEA6发挥功能时是通过正向调控MSMO1。接着明确MAGEA6发挥功能时形成的复合体的主要成分为可能为L10K,RS10L以及CHTOP,而MAGEA6是通过与MSMO1间接相互作用来相互调控其功能的。因此我们认为MAGEA6可能通过与L10K,RS10L以及CHTOP形成复合体来发挥功能,并间接调控MSMO1来影响RNA聚合酶II从而影响细胞的转录。本研究在更深入探究MAGEA6功能的基础上为癌症的研究提供了新思路。