论文部分内容阅读
目的 探讨 CD137-CD137L 信号是否通过 c-Jun 氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)通路影响小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)自噬。 方法 组织块贴壁法进行 C57BL/6J 小鼠胸主动脉 VSMCs 原代培养。将培养的原代小鼠VSMCs分为四组,即对照组、CD137激动组、DMSO(二甲基亚砜)组及JNK抑制组。采用Western blot检测各组磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylate c-Jun N-terminal kinase, p-JNK)、微管相关蛋白1轻链3II(microtubule associated protein1 light chain3 II, LC3II )及 Sequestosome1 ( p62/SQSTMl )蛋白表达水平;自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)荧光显微镜观察自噬流变化;透射电镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体变化。 结果 (1) 激动CD137-CD137L信号,小鼠VSMCs中p-JNK表达上升(P<0.05 vs 对照组),同时自噬起始相关蛋白LC3II及自噬中晚期相关蛋白p62表达水平也均高于对照组(P均<0.05 vs 对照组),而在CD137激动组基础上加入JNK抑制剂(SP600125)后,p-JNK的表达水平下降(P<0.05 vs CD137激动组),而LC3II及p62蛋白表达水平也低于CD137激动组(P均<0.05 vs 对照组)。DMSO组p-JNK、LC3II及p62蛋白表达水平与CD137激动组相比无统计学意义(P均>0.05)。 (2) 自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染各组小鼠VSMCs后,荧光显微镜下观察到CD137激动组荧光斑点总数及黄色荧光点数多于对照组(P均<0.05 vs 对照组),且CD137激动组内黄色荧光斑点数多于红色荧光斑点数(P<0.05)。而JNK抑制组荧光斑点总数及黄色荧光点数少于CD137激动组(P均<0.05 vs 对照组),同时JNK抑制组内红色荧光斑点数多于黄色荧光斑点数(P<0.05)。DMSO 组荧光斑点总数和黄色荧光点数与CD137激动组相比无明显差异(P均>0.05)。 (3) 透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)下观察到CD137激动组细胞内自噬小体与自噬溶酶体总数较对照组增多(P均<0.05),且CD137激动组内自噬小体多于自噬溶酶体(P<0.05)。JNK 抑制组细胞内自噬小体与自噬溶酶体总数较CD137激动组减少(P均<0.05),JNK抑制组内自噬溶酶体多于自噬小体(P<0.05)。DMSO组细胞内自噬小体与自噬溶酶体数量与 CD137 激动组比较无统计学意义(P均>0.05)。 结论 CD137-CD137L信号可能通过JNK信号通路影响小鼠VSMC自噬。