论文部分内容阅读
【目的】 研究实验性氧化损伤的人视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞中细胞凋亡抑制基因bcl-2表达的变化及促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）对bcl-2基因表达的影响。 【方法】实验分为三组,正常组、氧化损伤组及EPO处理组。将600μmol几H2O2加入RPE细胞培养液中,并分别孵育3h、6h及24h以制备RPE细胞氧化损伤模型。EPO处理组即在氧化损伤的同时将终浓度为40U/ml的重组人促红细胞生成素（recombination human erythropoietin,rhEPO）加入RPE细胞培养液中,并分别孵育3h、6h及24h。采用细胞免疫化学技术检测凋亡抑制基因bcl-2蛋白的表达,应用半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术测定bcl-2mRNA量。【结果】 （1）细胞免疫化学技术发现凋亡抑制基因bcl-2在正常的人视网膜色素上皮细胞中即有表达,在氧化损伤后3h、6h及24h其表达的水平依次降低,对细胞bcl-2蛋白染色强弱进行测定,损伤3h、6h及24h组的平均光密度值分别为61.83±2.83、56.32±2.90、42.10±3.10与正常对照组（81.58±2.40）比较差异均有显著性意义（P<0.05）;RT-PCR技术检测到氧化损伤3h、6h及24h后,bcl-2 mRNA的相对表达量分别为0.67±0.04、0.43±0.03、0.19±0.05,亦较正常的RPE细胞（0.98±0.08）明显减少,与上述bcl-2蛋白的表达变化一致。（2）EPO处理组bcl-2表达变化规律与氧化损伤组基本一致,但均较相应时段的氧化损伤组明显增加（P<0.05）。【结论】 凋亡抑制基因bcl-2在氧化损伤的人视网膜色素上皮细胞中表达降低,表明其参与了视网膜氧化损伤的机制;EPO使bcl-2在氧化损伤的视网膜色素上皮细胞中的表达明显增加;EPO可能通过增加bcl-2的表达,进而抑制RPE细胞的凋亡来实现对RPE细胞氧化损伤的治疗作用。