【摘 要】
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在对家蚕蛹cDNA文库测序中，筛选到一个家蚕未知功能基因Bm-X，通过对其cDNA序列生物信息学分析。该cDNA序列全长为778bp，开放阅读框(OgF)长444bp，其编码的蛋白质Bm-X，全长147个氨基
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在对家蚕蛹cDNA文库测序中，筛选到一个家蚕未知功能基因Bm-X，通过对其cDNA序列生物信息学分析。该cDNA序列全长为778bp，开放阅读框(OgF)长444bp，其编码的蛋白质Bm-X，全长147个氨基酸残基，预测相对分子量为16.4kDa，等电点为3.69，为无信号肽的非分泌的酸性蛋白。
经PCR扩增得到Bm-X基因片段，经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后，插入相应酶切后质粒pET-28a(+)，构建重组融合蛋白表达载体pET-28a(+)-Bm-X,经PCR、酶切鉴定重组正确。将构建的重组质粒转化大肠杆菌Rosseta(DE3)菌株感受态细胞，筛选重组菌株后以IPTG诱导表达，裂解菌体作SDS-PAGE分析，在20.1kD处有一浓集的特异性蛋白条带，表达量可达菌体总蛋白的50％左右。融合蛋白以可溶形式存在，超声波裂解菌体后离心收集上清液，采用镍离子亲和层析柱纯化重组融合蛋白rBm-X。以该融合蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔制备了多克隆抗体，ELISA检测该抗体血清的效价可达到1:8000以上。Westernblotting检测表明制备的多克隆血清具有较高的特异性。随后以多克隆抗体为工具，对Bm-X基因进行亚细胞定位，并分析Bm-X基因在五龄家蚕各组织蛋白和蛹中的表达分布：Bm-X在家蚕BmN细胞的细胞质和细胞核中都存在，但是以细胞质中居多。Bm-X基因的表达信号主要分布于五龄家蚕中肠、头部、表皮与脂肪体，在蛹中的信号则相对偏低。
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