动物体内有多种蛋白消化酶。蛋白消化酶类协同作用,分解蛋白质,利于肠道对氨基酸的吸收。胰蛋白酶、糜蛋白酶和弹性蛋白酶存在于几乎所有脊椎动物和无脊椎动物的消化道内,它们属于肽链内切酶。胰蛋白酶是其中一种重要的动物蛋白水解酶,专一性强,专一水解精氨酸、赖氨酸（三种碱性氨基酸之两种）羧基参与形成的肽键、酰胺键和酯键,其高度专一性表现为对碱性氨基酸一端的选择,属于族专一性（基团专一性）。本研究目的是草鱼肝胰脏中纯化胰蛋白酶并对其性质进行分析研究。 草鱼胰蛋白酶（GT）的纯化: 本实验采用硫酸铵分级沉淀和鸡卵类粘蛋白偶联的琼脂糖凝胶亲和层析,得到两种酶,即胰蛋白酶A（GTA）和胰蛋白酶B（GTB）。 胰蛋白酶用0.5 M NaCl,0.05 M CACl₂,0.05 M Tris-HCI（pH8.0）粗酶抽提缓冲液抽提出来,得到粗酶抽提液。将粗酶抽提液加入固体硫酸铵至30%饱和度,4℃静置3h后,离心（8000 rpm,0℃,20 min）,将沉淀弃置,上清液中继续加入固体硫酸铵至70%饱和浓度,4℃静置过夜,离心（8000rpm,0℃,15 min）,收集沉淀,将其用适量的亲和柱平衡液Tris-HCI缓冲液（pH8.0,50 mM）溶解。得粗酶液.装柱:取一支层析柱,先装入1/4体积的亲和柱平衡液（0.1 M pH=8.0,含0.05 MCaCl₂的Tris-HCI溶液）。然后将亲和吸附剂轻轻搅匀,缓缓加入柱内,待其自然沉降,调好流速3 mL/10 min左右,用亲和柱平衡液平衡,检测流出液A₂₈₀值小于0.02。上样:将上一步得到的硫酸铵分级沉淀粗酶液用5 M NaOH调至pH=8.0,（若有沉淀,过滤去除之）。沉淀用0.5 M NaCl,0.05 M CaCl₂,0.05 MTris-HCI（pH7.0）缓冲液溶解。然后,取一定体积上述澄清溶液上柱吸附。亲和层析柱用同一缓冲液洗去杂蛋白,再用0.5 M glycine-HCI（pH3.5）缓冲液洗脱,收集一个有胰蛋白酶活性的蛋白峰,是为GTA。然后再用0.5 M glycine-HCI（pH3.0）缓冲液洗脱,收集另一个有胰蛋白酶活性的蛋白峰,即GTB。立即加入pH调节液,将pH调到9.0左右。结果GTA纯化了243倍,比活力61388 TAME单位/mg,产率30.3%。GTB纯化了5倍,比活力1447 TAME单位/mg,产率0.2%。SDS-PAGE后银染,结果显示两种酶均为一条带,两种酶分子量约为27 kDa。