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目的:
通过观察化瘀软肝胶囊对气滞血瘀型非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)模型大鼠血清血脂四项(TC、TG、HDL-C、LDL-C)、肝酶(AST、ALT)含量的影响,及对过氧化物酶体增殖激活受体α(Peroxisome proliferation-activated receptorα,PPARα)、固醇调节元件结合蛋白1(Sterol-regulatory element binding proteins1,SREBP1)表达的影响,探讨化瘀软肝胶囊治疗气滞血瘀型非酒精性脂肪性肝病的作用机制,为化瘀软肝胶囊的临床使用提供实验依据。
方法:
将60只SD雄性大鼠适应性喂养一周后随机分为空白组(12只)和模型组(48只)。空白组正常喂养,模型组以束腿绑尾刺激、高脂饮食诱导及药物干预的复合因素方法复制气滞血瘀型非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,造模8周后,随机抽取空白组与模型组大鼠各3只,观察其一般情况、抽取股动脉血检测血脂四项及肝酶、HE法染色观察肝组织病理变化,以验证造模是否成功。造模成功后,将45只NAFLD大鼠按随机数字表法随机分成5组(每组9只),依次为:阴性对照组,阳性对照组(瑞舒伐他汀钙片组),中药高、中、低剂量组(化瘀软肝胶囊高、中、低剂量组)。造模结束后,所有大鼠正常喂养,化瘀软肝胶囊高、中、低剂量组分别按55mg/ml、27.5mg/ml、13.75mg/ml的混悬液以1ml/100g灌胃;瑞舒伐他汀钙片按0.09mg/ml的混悬液以1ml/100g灌胃,空白组和阴性对照组以1ml/100g生理盐水灌胃,六组均灌胃给药4周,2次/日。干预4周后取材行相关检测。实验期间观察并记录各组大鼠的一般情况、体重;检测血清血脂四项、肝酶;光镜下观察肝组织的病理学变化;采用ELISA法检测血清中PPARα的含量;免疫组化法检测肝组织中PPARα、SREBP1的蛋白含量;RT-PCR技术检测肝组织中PPARαmRNA、SREBP1mRNA水平。
结果:
1.与空白组相比,阴性对照组大鼠形体肥大,情绪暴躁,食欲减退,精神欠佳,活动减少,反应灵敏度减弱,毛发枯黄凌乱无光泽,眼球呈暗红色,舌质暗有瘀斑,皮肤及耳廓处黏膜颜色暗淡,大便黏腻,多不成形。与阴性对照组相比各治疗组大鼠一般情况均有不同程度的改善。
2.在第4周、8周、12周大鼠的体重均呈上升趋势,空白组大鼠体重增长趋势较平稳,与空白组相比阴性对照组在第4周、8周、12周体重明显增加,8周至12周各治疗组大鼠体重增长趋势较阴性对照组缓慢。
3.与空白组相比,阴性对照组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量均明显升高,血清HDL-C含量明显降低。与阴性对照组比较,各治疗组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C均有不同程度的降低、HDL-C均有不同程度的升高。
4.光镜下观察各组大鼠肝组织病理变化,与空白组相比阴性对照组存在明显的脂肪变性;与阴性对照组对比各治疗组肝细胞脂肪性病变具有不同程度的减轻。
5.与空白组相比各组大鼠血清PPARα水平均有不同程度的降低;与阴性对照组相比除中药低剂量组外各治疗组大鼠血清PPARα水平均有不同程度的升高。
6.与空白组比较,阴性对照组大鼠肝组织PPARα阳性表达降低,与阴性对照组比较,药物干预组大鼠肝组织PPARα阳性表达增高;与空白组比较,阴性对照组大鼠肝组织SREBP1的阳性表达增高,与阴性对照组比较,药物干预组大鼠肝组织SREBP1的阳性表达降低。
7.与空白组相比各组大鼠肝组织中PPARαmRNA水平均降低,阴性对照组PPARαmRNA水平降低明显;与阴性对照组相比,除中药低剂量组外各治疗组PPARαmRNA水平均呈不同程度升高;与空白组相比阴性对照组、阳性对照组、中药低剂量组大鼠肝组织中SREBP1mRNA水平均升高;与阴性对照组相比,各治疗组中SREBP1mRNA水平均呈明显降低。
结论:
1.气滞血瘀型NAFLD模型大鼠存在明显的脂质代谢异常。
2.化瘀软肝胶囊能使NAFLD大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量明显降低,血清HDL-C含量升高,说明化瘀软肝胶囊能有效调节血脂、改善肝功,调节机体脂质代谢。
3.化瘀软肝胶囊高、中剂量能升高血清PPARα含量,肝组织中PPARαmRNA的水平及蛋白表达;可降低肝组织中SREBP1mRNA的水平及蛋白表达。由此可以推断,化瘀软肝胶囊治疗气滞血瘀型NAFLD的机制可能与调节PPARα和SREBP1的表达,进而调节机体脂质代谢有关。PPARα、SREBP1可能是化瘀软肝胶囊治疗NAFLD的重要靶点。
通过观察化瘀软肝胶囊对气滞血瘀型非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)模型大鼠血清血脂四项(TC、TG、HDL-C、LDL-C)、肝酶(AST、ALT)含量的影响,及对过氧化物酶体增殖激活受体α(Peroxisome proliferation-activated receptorα,PPARα)、固醇调节元件结合蛋白1(Sterol-regulatory element binding proteins1,SREBP1)表达的影响,探讨化瘀软肝胶囊治疗气滞血瘀型非酒精性脂肪性肝病的作用机制,为化瘀软肝胶囊的临床使用提供实验依据。
方法:
将60只SD雄性大鼠适应性喂养一周后随机分为空白组(12只)和模型组(48只)。空白组正常喂养,模型组以束腿绑尾刺激、高脂饮食诱导及药物干预的复合因素方法复制气滞血瘀型非酒精性脂肪性肝病大鼠模型,造模8周后,随机抽取空白组与模型组大鼠各3只,观察其一般情况、抽取股动脉血检测血脂四项及肝酶、HE法染色观察肝组织病理变化,以验证造模是否成功。造模成功后,将45只NAFLD大鼠按随机数字表法随机分成5组(每组9只),依次为:阴性对照组,阳性对照组(瑞舒伐他汀钙片组),中药高、中、低剂量组(化瘀软肝胶囊高、中、低剂量组)。造模结束后,所有大鼠正常喂养,化瘀软肝胶囊高、中、低剂量组分别按55mg/ml、27.5mg/ml、13.75mg/ml的混悬液以1ml/100g灌胃;瑞舒伐他汀钙片按0.09mg/ml的混悬液以1ml/100g灌胃,空白组和阴性对照组以1ml/100g生理盐水灌胃,六组均灌胃给药4周,2次/日。干预4周后取材行相关检测。实验期间观察并记录各组大鼠的一般情况、体重;检测血清血脂四项、肝酶;光镜下观察肝组织的病理学变化;采用ELISA法检测血清中PPARα的含量;免疫组化法检测肝组织中PPARα、SREBP1的蛋白含量;RT-PCR技术检测肝组织中PPARαmRNA、SREBP1mRNA水平。
结果:
1.与空白组相比,阴性对照组大鼠形体肥大,情绪暴躁,食欲减退,精神欠佳,活动减少,反应灵敏度减弱,毛发枯黄凌乱无光泽,眼球呈暗红色,舌质暗有瘀斑,皮肤及耳廓处黏膜颜色暗淡,大便黏腻,多不成形。与阴性对照组相比各治疗组大鼠一般情况均有不同程度的改善。
2.在第4周、8周、12周大鼠的体重均呈上升趋势,空白组大鼠体重增长趋势较平稳,与空白组相比阴性对照组在第4周、8周、12周体重明显增加,8周至12周各治疗组大鼠体重增长趋势较阴性对照组缓慢。
3.与空白组相比,阴性对照组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量均明显升高,血清HDL-C含量明显降低。与阴性对照组比较,各治疗组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C均有不同程度的降低、HDL-C均有不同程度的升高。
4.光镜下观察各组大鼠肝组织病理变化,与空白组相比阴性对照组存在明显的脂肪变性;与阴性对照组对比各治疗组肝细胞脂肪性病变具有不同程度的减轻。
5.与空白组相比各组大鼠血清PPARα水平均有不同程度的降低;与阴性对照组相比除中药低剂量组外各治疗组大鼠血清PPARα水平均有不同程度的升高。
6.与空白组比较,阴性对照组大鼠肝组织PPARα阳性表达降低,与阴性对照组比较,药物干预组大鼠肝组织PPARα阳性表达增高;与空白组比较,阴性对照组大鼠肝组织SREBP1的阳性表达增高,与阴性对照组比较,药物干预组大鼠肝组织SREBP1的阳性表达降低。
7.与空白组相比各组大鼠肝组织中PPARαmRNA水平均降低,阴性对照组PPARαmRNA水平降低明显;与阴性对照组相比,除中药低剂量组外各治疗组PPARαmRNA水平均呈不同程度升高;与空白组相比阴性对照组、阳性对照组、中药低剂量组大鼠肝组织中SREBP1mRNA水平均升高;与阴性对照组相比,各治疗组中SREBP1mRNA水平均呈明显降低。
结论:
1.气滞血瘀型NAFLD模型大鼠存在明显的脂质代谢异常。
2.化瘀软肝胶囊能使NAFLD大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C含量明显降低,血清HDL-C含量升高,说明化瘀软肝胶囊能有效调节血脂、改善肝功,调节机体脂质代谢。
3.化瘀软肝胶囊高、中剂量能升高血清PPARα含量,肝组织中PPARαmRNA的水平及蛋白表达;可降低肝组织中SREBP1mRNA的水平及蛋白表达。由此可以推断,化瘀软肝胶囊治疗气滞血瘀型NAFLD的机制可能与调节PPARα和SREBP1的表达,进而调节机体脂质代谢有关。PPARα、SREBP1可能是化瘀软肝胶囊治疗NAFLD的重要靶点。