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第一部分CNP及其受体NPR-B在雌性大鼠生殖道的表达目的检测CNP及其性受体NPR-B在雌性大鼠生殖道中的表达。方法采用免疫组化方法检测CNP及其特异性受体NPR-B在雌性大鼠生殖道(宫颈、子宫、输卵管)的表达及定位。结果免疫组织化学结果显示,CNP及其受体NPR-B在雌性大鼠生殖道均有表达且表达位置相似,分别表达于宫颈粘膜鳞状上皮细胞、子宫内膜柱状上皮细胞、输卵管粘膜上皮细胞。结论CNP及其受体NPR-B分别表达于宫颈粘膜、子宫内膜、输卵管粘膜上皮细胞,尤其是在子宫内膜柱状上皮细胞、输卵管粘膜上皮细胞中表达明显。第二部分CNP通过c GMP来调控精子功能目的探讨CNP对精子内c GMP含量的影响及通过c GMP来调节精子功能。方法取正常精液标本,离心法去除精浆,制备精子悬液。给予不同浓度CNP(0、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)处理精子0.5h,然后运用酶联免疫吸附试验检测精子内第二信使环磷酸鸟苷(c GMP)浓度变化。分别使用CNP、c GMP类似物(8-Br-c GMP)、c GMP依赖性蛋白激酶(PKG)抑制剂(KT5823)孵育精子0.5h,CASA系统分析精子活力的变化;孵育精子6h后,考马斯亮蓝染色法检测顶体反应率的变化。结果1、不同浓度CNP处理精子0.5h均可增加精子内c GMP的含量,1×10-6mol/L CNP可显著增加精子c GMP浓度。经方差分析,与对照组相比,1×10-7mol/L CNP处理组的差异有统计学意义(P﹤0.05),1×10-6mol/L CNP处理组的差异有明显统计学意义(P﹤0.01);2、与空白对照组相比,CNP、8-Br-c GMP处理精子0.5h后,能增强精子活力,差异具有统计学意义(P﹤0.05),而KT5823则显著降低精子活力(P﹤0.01);CNP、8-Br-c GMP处理精子6h后,能明显增强精子顶体反应率(P﹤0.01),而PKG抑制剂KT5823则降低顶体反应率,差异具有统计学意义(P﹤0.05)。结论CNP可以提高精子活力、顶体反应率,其信号通路是通过增加细胞内c GMP浓度,并激活其下游信号分子PKG的活性,进而调控精子获能。第三部分CNP通过c GMP来调控精子获能的分子机制目的探讨CNP/c GMP调控精子获能的分子机制方法分别使用CNP、c GMP类似物(8-Br-c GMP)、c GMP依赖性蛋白激酶(PKG)抑制剂KT5823孵育精子2h,然后运用Western Blot技术检测获能时精子内蛋白质氨酸磷酸化水平变化;运用Fluo 3-AM荧光探针检测获能精子Ca2+内流情况。结果1、1×10-7mol/L CNP处理组、1×10-6mol/L CNP处理组、1×10-6mol/L CNP处理不同时间组与对照组相比均未见明显蛋白质酪氨酸磷酸化水平变化,经方差分析,各处理组与对照组相比无明显统计学差异(P>0.05);2、与对照组相比,CNP、8-Br-c GMP处理精子2h后,均能促进Ca2+内流,经方差分析具有统计学意义(P﹤0.05),而PKG抑制剂KT5823则明显抑制Ca2+内流(P﹤0.01)。结论CNP/c GMP通过激活下游信号分子PKG,从而促进Ca2+内流,进而通过调节精子活力及顶体反应来调控精子获能;CNP/c GMP对精子内蛋白质酪氨酸磷酸化水平无显著影响。