论文部分内容阅读
目的:本研究通过检测单独/联合TSA、CYA用药后胰腺癌PANC-1的细胞凋亡、凋亡相关基因表达的变化以及Hedgehog(Hh)信号通路的活性的改变，评价组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(TSA)联合Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环巴胺(CYA)干预对胰腺癌PANC-1细胞凋亡的影响，并初步探讨其机制。 方法:予以TSA、CYA单独/联合处理PANC-1细胞24h后，Hochest33258荧光染色观察细胞形态结构的改变;采用CCK8方法检测两药单独/联合处理对胰腺癌PANC-1细胞的细胞毒性作用，并计算PANC-1细胞50％抑制浓度(IC50)以及两药联合指数(CI);逆转录荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因以及Hh信号通路关键分子（Gli1, Gli3, Smo）mRNA表达的变化;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡相关蛋白(Bcl-2，Activated caspase-3，Activated caspase-8，Activated caspase-9)及Hh通路关键分子蛋白(Gli1，Smo，Ptc-1)表达的改变;细胞免疫荧光标记法(IF)检测Gli1蛋白表达的变化。 结果: Hochest33258染色显示，TSA、CYA均可明显诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡，24h IC50分别为（0.51±0.07）μmol/L和（33.6±2.3）μmol/L，两药联合指数为0.835，具有低度协同作用。TSA、CYA单独/联合干预胰腺癌PANC-1细胞后，Bcl-2mRNA表达下降的同时上调Bax mRNA表达，两者变化均以联合组明显;TSA0.5μmol/L干预可抑制Gli1 mRNA的表达，联合CYA20μmol/L后对Hh通路的抑制效应进一步增强，降低Gli1、Smo mRNA表达量，上调Gli3 mRNA的表达。WesternBlot结果显示，TSA0.5μmol/L、CYA20μmol/L单独及联合处理PANC-1后，凋亡相关蛋白Activated caspase-3，Activated caspase-8，Activated caspase-9的表达进一步上调，凋亡抑制因子Bcl-2的表达明显下降，Hh信号关键分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表达均下降，以联合组最为明显;细胞免疫荧光(IF)结果同样显示Gli1表达明显下降，与Western Blot结果相符。 结论: 1.TSA及CYA均可诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡，具有浓度依赖性;两药联合可协同促进PANC-1细胞凋亡。 2.CYA可明显抑制胰腺癌PANC-1细胞Hh通路的活性，TSA亦可抑制Gli1的表达，下调Hh通路的活性，两药联合可协同抑制胰腺癌PANC-1细胞Hh通路的活性，调节凋亡相关分子表达，诱导胰腺癌PANC-1细胞的凋亡。