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目的观察肌苷对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)神经细胞凋亡和细胞色素C(CytC)基因表达的影响。
方法新生7日龄SD大鼠75只随机分为正常对照组、肌苷治疗组(HI后即刻起给予肌苷100mg/kg,腹腔注射,每日2次,连续7天)和HIBD组(各组n=25)。分别于HI后6h、12h、1d、3d、7d制备标本,以TUNEL法检测神经元凋亡情况,原位杂交技术测定CytCmRNA表达情况。
结果1.细胞凋亡情况:正常对照组皮质区和海马区分别有少许TUNEL阳性细胞;HI后6hHIBD组皮质区和CA1区凋亡细胞数即见增多,于HI后1d达高峰,皮质区与CA1区TUNEL阳性细胞数分别为(61.00±6.56)个/视野、(56.67±1.53)个/视野,与正常对照组相比差异具有显著性(P<0.05),之后逐渐下降,HI后7d皮质区与CA1区阳性细胞数分别为(16.00±2.00)个/视野、(16.33±1.53)个/视野,仍明显高于正常对照组(P<0.05)。肌苷治疗组细胞凋亡的数量变化规律与HIBD组基本一致,其中HI后1d阳性细胞数皮质区和CA1区分别为(46.00±2.02)个/视野、(38.00±2.00)个/视野,各时间点与HIBD组相应时间点比较,凋亡细胞数明显减少,差异有显著性(P<0.05)。2.CytCmRNA表达:正常对照组皮质区和海马区分别有少许CytC阳性细胞;HIBD组在HI后6h皮质区、CA1区CytC阳性细胞均增多,于HI后1d达峰值,阳性细胞数分别为(111.67±1.53)个/视野、(81.67±1.53)个/视野,与正常对照组相比差异具有显著性(P<0.05),之后逐渐下降,HI后7d皮质区与CA1区阳性细胞数分别为(30.67±1.15)个/视野、(27.67±1.53)个/视野,仍明显高于正常组(P<0.05)。肌苷治疗组神经细胞CytCmRNA表达变化规律与HIBD组基本一致,其中HI后1d阳性细胞数皮质区和CA1区分别为(77.67±2.52)个/视野、(58.33±1.53)个/视野,各时间点与HIBD组相应时间点比较,阳性细胞数明显减少,差异有显著性(P<0.05)。3.相关分析显示缺氧缺血性脑损伤后,凋亡细胞数与CytCmRNA表达呈显著正相关(r=0.88,P<0.01)。
结论1.HI损伤后给予肌苷干预能减少HI导致的神经细胞凋亡数,能使脑皮质区及CA1区CytCmRNA表达下调;2.肌苷治疗后,新生HIBD大鼠的凋亡细胞数减少与CytCmRNA表达下调呈显著正相关,提示肌苷可能通过抑制CytCmRNA表达从而起到减少细胞凋亡保护神经元的作用。