【摘 要】
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银杏是现存种子植物中最古老的世界著名活化石之一,是我国所特有的第四纪冰川孑遗植物。目前,对银杏叶片提取物药用价值的研究已经越来越广泛,然而从分子生物学角度研究其生
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银杏是现存种子植物中最古老的世界著名活化石之一,是我国所特有的第四纪冰川孑遗植物。目前,对银杏叶片提取物药用价值的研究已经越来越广泛,然而从分子生物学角度研究其生理生化过程却相对较少。本文以银杏为材料,成功建立了叶片总RNA的提取方法,仔细分析了幼苗叶片发育初期光系统Ⅱ各亚基的代谢水平,还克隆出一新的cDNA基因片段,简要总结如下。 首先,为了从含有大量黄铜、萜类化合物、多糖、多酚等次生代谢产物的银杏叶片中提取高质量的RNA,我们结合了CTAB法及本实验室传统方法建立了适合银杏总RNA提取的新方法。在标准CTAB提取缓冲液中加入不可溶的聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）和高浓度的β-巯基乙醇;经酚/氯仿抽提之后用醋酸/乙醇沉淀核酸,再用3M醋酸钠溶液洗去大部分DNA沉淀,最后用酚/氯仿抽提除去多糖。所得RNA紫外吸收比值A260/A230和A260/A280均在2.0附近,总量约为0.4 mg/g鲜重叶片。琼脂糖变性胶电泳显示出包括细胞核rRNA和叶绿体rRNA在内的至少7条清晰条带。Northern blot杂交信号锐利清晰,无拖尾弥散现象。同时,细胞核基因cab及叶绿体基因rbcL的cDNA都通过RT-PCR成功扩增出来。实验结果表明,此方法所得RNA质量足以满足基因表达和分子克隆等分子生物学研究需要。 此外,本文还研究了在银杏幼苗发育初期阶段,叶绿素含量、PSⅡ亚基组
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