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水蛭(Hirude nipponica Whitman)属于环节动物门,蛭纲,颚蛭目,水蛭科,在内陆淡水水域内生长繁殖,是我国传统的特种药用水生动物。其性平苦咸,有小毒,作用始载于《神农本草经》,具有逐血化瘀,通经活血之功效。通常以单味水蛭或配伍复方的形式在现代中医中使用,采用煎剂、胶囊剂、片剂、丸剂、口服液等多种剂型,通过内服外敷和局部注射等多种途径给药,广泛治疗不同系统、病位的血瘀症,适应症包括心脑血管、肝、肾、血液等疾病,还包括一些外伤疼痛等疾病。但是中医传统炮制工艺存在较多的局限性,使得阐明水蛭的药效机制及确切的药效成分具有一定的困难性,在很长一段时间内都未能得到明确的研究进展,而现代医药需求的快速发展给药用水蛭的开发带来了更高的要求,近年来水蛭的医用研究越来越广泛,药用水蛭的研究方向主要集中在研发出药用效果较高,成分明确,药效机制清楚的水蛭药物等方面。本课题采用国内市场上最常见的非吸血类水蛭-宽体金线蛭为实验原材料,采用仿生酶解技术得到水蛭粗提物,进一步采用离子交换层析色谱,凝胶色谱等分离纯化技术对水蛭粗提物分离纯化,得到具有纤溶活性的水蛭活性蛋白,并对其进行质谱分析和部分性质的检测与鉴定,以用于后续的药理研究。论文的主要内容如下：1.水蛭纤溶活性粗提物的提取分离：在水蛭纤溶活性粗提物的提取分离过程中,参考药典及相关文献的报道,确定了以纤维蛋白平板溶圈法作为筛选纤溶活性物质的方法。通过鲜品水蛭和干品水蛭的活性对比,最后选用了便于储存,方便处理的干品水蛭作为实验的药材原材料。确定了通过利用胰蛋白酶50℃下水浴酶解,经过醇沉之后得到水蛭活性粗提物,采用调整酸碱度至pH9.5的方法终止酶解反应的进行,以消除胰蛋白酶和粗酶对活性筛选的影响。得到的粗提物冻干品,粗提物的得率为2.97%,经双缩脲法测定粗提物中蛋白质含量为0.685%。2.水蛭纤溶活性粗提物的分离纯化：在粗提物的分离纯化过程中,优化和筛选方法分别采用了Q-SepHrose FF离子层析、SepHadex G-10凝胶层析和SepHacryl s200凝胶层析等方法。得到了具有纤溶活性的单一蛋白质物质,通过计算得知蛋白质的得率为0.0049%。3.水蛭纤溶活性蛋白的性质分析和鉴定：利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验,得到了单一的蛋白质条带,证明了分离纯化得到的纤溶活性物质为单一蛋白。之后将SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳实验得到的单一条带进行了MALDI-TOF质谱分析,推测其为一种新蛋白。