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小鹅瘟是由小鹅瘟病毒(GPV)引起的雏鹅的急性传染病,该病致死率高,对养鹅业危害严重。自1956年我国学者方定一首先发现本病并用鹅胚分离出世界第一株小鹅瘟病毒以来,国内外学者对小鹅瘟开展了大量研究并取得了一定的进展。小鹅瘟的诊断是目前学者们普遍关注的问题,这一问题直接关系养鹅业的发展。 本实验参照李茂祥老师的方法,采用2.2%NaCl、6% PEG浓缩病毒,Sepharose—4B柱层析,提纯病毒抗原。用该抗原免疫6~8周龄Balb/C小鼠,进行四次免疫。选择免疫效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓(广留)细胞进行细胞融合,78孔有融合细胞生长,融合率约为21%。用间接ELISA法筛选出8孔能分泌抗GPV的单克隆抗体,阳性率约为10.26%。采用有限稀释法进行3次克隆,经检测和筛选最终获得3株能够稳定分泌抗GPV的单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为2B8、2B10和2H7。用胶体金标记制备好的GPV单克隆抗体2B8株,将马抗GPV的多克隆抗体包被在NC膜的检测线上,羊抗鼠抗体包被在阴性对照线上,建立检测小鹅瘟病毒的胶体金免疫层析试纸条。试纸条的样品端插入待检样品液体中,取出后平放,5分钟后观察结果。结果只在对照线(C)上出现一条红线,表示为阴性结果;在检测线(T)和对照线(C)上出现两条红线,表示为阳性结果。本实验通过对实验条件的摸索,选用pH8.2 0.1% PEG—600-TBS作为金标单抗稀释液,将金标单抗作1∶4稀释,选用0.01M pH9.0 TBS液作为包被液,将GPV多抗作1∶4稀释,将羊抗鼠抗体作1∶4稀释;选用0.1%PEG—600-TBS作为样品稀释液。 通过本实验,制备了检测GPV的胶体金试诊断纸条,该方法可大量节省该病的诊断时间,既适合基层应用,也适合实验室诊断。