甘蔗（Saccharum spp.）作为我国最重要的糖料作物,其狭窄的遗传基础阻碍了甘蔗品种的产量和品质的进一步提高。导入新种制质,拓宽遗传基础是选育突破性品种的前提,而斑茅（Erianthus arundinaceus）作为甘蔗属的一个近源属野生种,具有多种甘蔗遗传改良所需的优良性状。然而,斑茅与甘蔗杂交利用的高贵化进程缓慢,主要是由于斑茅与甘蔗的BC1代中出现染色体特殊加倍现象,为了明确这种染色体遗传机制,必须对染色体进行区分标记,为此我们开展了以下工作:一是通过反向斑点杂交技术（Reverse Dot Blot,RDB）确立Cot富集中高拷贝重复序列的技术体系。二是将获得的重复序列作为探针,利用荧光原位杂交技术定位在斑茅染色体上,获得不同类型的探针序列。三是通过利用中高拷贝的重复序列和低拷贝的BAC序列构建斑茅染色体核型。主要研究结果如下:1、构建了斑茅Cot DNA文库:将斑茅基因组DNA随机打断,设置Cot-1、Cot-20、Cot-60和Cot-100四个复性时间梯度,通过RDB技术验证得到Cot-20富集的中拷贝序列占31.25%,富集的高拷贝序列占16.67%。同时利用FISH技术验证Cot-20富集得到中拷贝序列在斑茅染色体上的信号位点表现多样性,有利于我们后期探针的筛选。故Cot-20为Cot文库构建的复性适宜时间,并得到一个含中高拷贝探针序列的Cot DNA文库。2、不同类型的重复序列FISH定位分析:将Cot文库得到的重复序列通过FISH技术定位到斑茅有丝分裂中期染色体上,可将筛选到的1350个探针序列分成9种类型:其中有727个序列定位于染色体两端端部,占筛选探针总量的53.85%;有163个序列定位于染色体一端端部,占筛选探针总量的12.07%;有31个序列定位于一部分染色体一端端部和一部分染色体两端端部,占筛选探针总量的2.30%;有23个序列定位于染色体两端端部和少量染色体的着丝粒,占筛选探针总量的1.70%;有38个序列定位于染色体两端端部和着丝粒,占筛选探针总量的2.81%;有6个序列在染色体中部弥散分布,占筛选总量的0.44%;有25个序列定位于着丝粒,占探针筛选总量的1.85%;有51个序列在染色体呈散布分布,占筛选总量的3.78%;有286个序列在染色体无信号,占筛选探针的21.19%。3、完善了斑茅多次重复荧光原位杂交技术:将前一次做完原位杂交的染色体玻片经过不同强度的洗脱后,可以将前一次杂交的探针完全地洗掉,而且不影响下一次杂交,目前本实验证明这种杂交可以重复做3次。这种重复杂交的实验方法可以有效的在同一中期染色体上判断各探针是否为同一类型和绘制染色体核型,同时还可以节约染色体标本。4、初步构建了斑茅染色体核型与染色体识别体系:通过将不同类型的探针按照位置和颜色差异组合并定位于斑茅染色体上。经过多次的组合杂交,最后我们利用探针Ea-0907、Ea-0098和45S rDNA识别出斑茅染色体组中的8条染色体。此外,我们通过三次重复杂交的方法,利用7个不同的探针初步构建了斑茅染色体FISH指纹图谱。5、利用甘蔗低拷贝BAC分析了斑茅、高粱和甘蔗间的进化:首先利用RDB技术分析了 27个低拷贝的BAC序列在甘蔗属、蔗茅属斑茅及高粱属的同源关系,初步判断这些序列在进化过程中不同物种的共线性,最后以FISH技术进一步验证得到,27个甘蔗BAC序列只有一个BAC-2序列在所有供试材料中具有较高的同源性。