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犬乳腺肿瘤作为临床上一种常见的疾病,与人乳腺肿瘤有很多相似之处,以其作为模型进行摸索,对人乳腺肿瘤的研究具有重大意义。近年来,对犬乳腺肿瘤细胞虽有研究,并取得了相应成就,但细胞周期同步化与周期调控机理仍有待研究。血清饥饿法和胸腺嘧啶核苷(TdR)双阻断法是使细胞同步于特定阶段的有效方法,但该法是否适用于犬乳腺肿瘤细胞至今尚未报道。紫杉醇作为20世纪天然抗肿瘤新药,现已普遍应用于人卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、及黑色素瘤的临床治疗中。其突出的疗效更是引起人们的广泛注意。但是紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞周期及肿瘤相关因子的影响还有待进一步证实。本实验就此一系列问题展开深入研究。实验采用体外培养的犬乳腺肿瘤细胞为研究对象,经0%、0.1%、0.2%、0.5%、1%和10%胎牛血清(FBS)的DMEM分别作用24h、32h、42h和54h,采用光学显微镜观察细胞形态学变化,通过碘化丙啶(PI)染色和流式细胞术检测不同条件下G0/G1期同步化效果。使用2.5mmol/L TdR检测其对犬乳腺肿瘤细胞周期的同步化作用。采用浓度为0.1μmol/L和0.05μmol/L的紫杉醇分别作用24h、48h、72h,检测其对细胞周期及其相关因子的影响。应用LightCycler2.0实时定量PCR仪,采用SYBR荧光染料的方法,对犬乳腺肿瘤中p27mRNA、p53mRNA和bcl-2mRNA进行检测,使用LightCycler Software4.1对实验数据进行处理,分析紫杉醇对肿瘤相关因子的影响。实验结果显示：低血清浓度使细胞营养严重不良,随着血清浓度慢慢增高,细胞的生长状况出现好转,但当培养时间达到54h时,绝大部分细胞已呈破碎状态,无完整的细胞形态。细胞受TdR双阻断后,胞质内黑色颗粒明显增多,有的出现空泡,且细胞折光性差。紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞的增殖抑制作用,随着药物浓度增加、时间增长,抑制作用增强,且诱导犬乳腺肿瘤细胞产生明显的凋亡。当血清浓度为0.5%,培养时间为42h时,G0/G1期同步化效率最高,达到87.47%。TdR双阻断法能时细胞很好的同步于G1期末,释放培养4h,S期细胞达到93.74%。释放培养8h后,绝大数细胞跨过S期,G2/M期比例为67.74%。紫杉醇有对犬乳腺肿瘤细胞有明显的G2/M期阻滞作用,且0.1μmol/L的紫杉醇比0.05μmol/L作用更加显著。p27基因变化呈逐渐升高的趋势,0.1μmol/L紫杉醇和0.05μmol/L紫杉醇作用24h,差异极显著(P<0.01)；与此同时,p53基因也呈逐渐升高的趋势,具有时间-剂量效应；而随着紫杉醇作用浓度的增高,作用时间的逐渐延长,bcl-2基因逐渐降低,同一浓度紫杉醇,不同作用时间的组内差异均极显著(P<0.01)通过本实验的研究得出以下结论：血清饥饿法将绝大部分细胞同步于G0/G1期,0.5%FBS的DMEM饥饿42h同步化犬乳腺肿瘤细胞的效果最佳,血清浓度对细胞的生长具有重要作用,浓度越低,细胞生长状况越差。TdR双阻断法能很好的使犬乳腺肿瘤细胞同步于G1期末。释放培养4h,细胞同步于S期的效果很佳；释放培养8h,细胞可较好的同步于G2/M期,且G2/M期细胞最脆弱,容易死亡脱落。紫杉醇对犬乳腺肿瘤细胞G2/M期阻滞作用明显,能诱导抑癌基因p27mRNA、p53mRNA表达上调,癌基因bcl-2mRNA表达下调。