【摘 要】
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[目的]季节性流感和潜在的流感大流行对公众和社会构成显著的威胁,也是全球卫生系统的负担。普遍流感免疫的最终目标是通过主动免疫获得广泛而持久的保护。由于流感病毒抗原的高度变异性,每年需要根据当年预测的突变株生产相应的流感疫苗,对于实现有效的疫苗诱导的免疫提出了巨大的挑战,因此需要开发能够交叉保护多型流感病毒的通用型流感疫苗。基于流感病毒基质蛋白2的胞外区M2e的高度保守性及抗原性和表面糖蛋白血凝素的
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[目的]季节性流感和潜在的流感大流行对公众和社会构成显著的威胁,也是全球卫生系统的负担。普遍流感免疫的最终目标是通过主动免疫获得广泛而持久的保护。由于流感病毒抗原的高度变异性,每年需要根据当年预测的突变株生产相应的流感疫苗,对于实现有效的疫苗诱导的免疫提出了巨大的挑战,因此需要开发能够交叉保护多型流感病毒的通用型流感疫苗。基于流感病毒基质蛋白2的胞外区M2e的高度保守性及抗原性和表面糖蛋白血凝素的茎部区域HA2高抗原性及相对保守性,并且利用铁蛋白可以自组装成球形纳米颗粒结构,构建M2e-HA2串联表位的自组装纳米颗粒,开展通用性纳米颗粒流感疫苗的研发。[方法]将流感病毒H1N1的M2e和HA2抗原表位与Ferritin蛋白串联表达,非变性条件下提取并经Ni-NTA亲和层析纯化、碘克沙醇密度梯度离心纯化获得自组装纳米颗粒,经Western Blot、考马斯亮蓝染色和透射电子显微镜验证后,通过皮下注射免疫5-7周龄的Balb/c小鼠,两次免疫后分别采集小鼠血清、脾脏淋巴细胞,使用ELISA、中和实验及ELISPOT等实验进行体液免疫和细胞免疫水平的免疫学评价。[结果]通过变性和非变性Western Blot、考马斯亮蓝染色和透射电子显微镜等结果验证,确定成功制备大小均一,结构完整的M2e-HA2-Ferritin自组装纳米颗粒。Balb/c小鼠的血清中和实验证明免疫M2e-HA2-Ferritin自组装纳米颗粒后可以产生针对H1N1、H3N2及H5N9的高效中和抗体,并且中和能力高于免疫M2e自组装纳米颗粒小鼠;ELISPOT证明免疫M2e-HA2-Ferritin自组装纳米颗粒后可以产生针对M2e、HA2、H1N1、H3N2及H5N9的分泌IFN-γ的细胞免疫,并且刺激分泌IFN-γ细胞免疫水平高于免疫M2e自组装纳米颗粒小鼠细胞免疫水平。[结论]成功构建基于Ferritin蛋白的M2e-HA2串联表位的自组装纳米颗粒,免疫后可以刺激小鼠产生高水平的针对多型流感病毒的中和抗体及分泌IFN-γ的细胞免疫水平,为构建高效广谱的通用流感疫苗的研发奠定基础。
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[目的]通过“人类外周血CD34+单个核细胞自体移植疗法”重建血栓闭塞性脉管炎（thromboangiitis obliterans,TAO）肢体远端缺血组织小血管的疗效分析来进一步证实干细胞移植改善TAO患者下肢血供的可行性。[方法]回顾性分析云南省第二人民医院血管外科2015年12月至2020年10月份接受干细胞移植或者巴曲酶保守治疗并符合标准的TAO患者85例资料。其中干细胞移植组患者43例
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