狗牙根属(Cynodon dactylon L.Pers)植物共有8个种,是一个暖季型多年生草皮型草种,分布于北纬45°至南纬45°区域内,是一种具有世界性分布的野生种,广泛应用于草坪,饲料和水土保持,具有高耐磨、耐旱、耐盐性和景观美化作用.鉴于狗牙根在生长范围和习性上有极大的多样性,具有丰富的变异、广泛的应用价值、生态作用和遗传多样性,该项研究以收集到的国内野生及国外引进商业品种种质资源为材料,通过RAPD技术进行遗传多样性研究,并在对相应材料进行耐盐筛选研究的基础上,建立了组培再生技术体系,进行了农杆菌介导的BADH基因转化研究,以期对狗牙根种质资源的遗传多样性进行评估,并通过离体耐盐筛选和基因转化生物技术获得抗盐新种质,为抗盐品种筛选和育种提供理论依据和技术支撑.主要研究成果如下:1采用优化SDS法,成功地提取了适合作为分子生物学研究的狗牙根总DNA,建立了狗牙根RAPD反应优化体系.2遗传多样性研究:选用狗牙根种质28个,通过RAPD分子标记技术进行了居群(Population)多态性分析.实验选用220个引物,依据扩增结果,对比可重复性、多态性后,筛选确定20个扩增效果好的引物进行扩增.3组培再生体系的建立.以种子作为外植体诱导愈伤组织为最佳,2.4-D浓度梯度以从高到低浓度(1.0、0.5、0.2、0.1mg.L<-1>)梯度培养和低浓度BA诱导胚性愈伤组织效果好,在筛选的胚性愈伤组织保持增殖培养基BI1上,胚性愈伤组织诱导率可达73％,最佳胚状体诱导分化培养基为GH<,3>.胚状体形成的小植株发育正常,在G<,3>培养基中从根部发出很多小植株,小植株移栽到花盆成活率达到100％,是一个良好的再生系统.4耐盐突变体的离体筛选.狗牙根不同品种和基因型耐盐性差异较大,0.2％NaCl胁迫下,各材料的发芽率最高,以后随浓度升高而降低;愈伤组织不适宜进行盐胁迫筛选,胚性愈伤组织较好,选择压以1.0％NaCl、时间2周为宜;利用茎段进行耐盐性筛选必须经历10个月以上的时间,并在NaCl浓度逐渐增加的情况下逐步筛选,方可筛选到耐3.0％变异体.5BADH基因转化体系的建立.