雷公藤甲素（Triptolide,TP）是从卫矛科植物雷公藤中分离出的环氧化二萜内酯化合物,作为雷公藤主要有效成分具有多种药理活性,常经皮给药用于治疗类风湿关节炎,但随着剂量增大和给药时间延长会引起红肿等皮肤刺激性反应。课题组前期发现雷公藤常与川芎配伍应用,且两者配伍可使皮肤毒性降低,但机理尚不明确。因此,本文从药物局部皮肤渗透、细胞摄取、酶代谢和氧化应激等方面探讨雷公藤甲素配伍川芎降低皮肤毒性的作用机制,为雷公藤临床应用提供理论支持。本文主要进行了以下研究:1.川芎配伍雷公藤甲素的皮肤刺激性研究以SD大鼠为研究对象,背部脱毛后将制备好的雷公藤甲素组、川芎组、配伍组及空白组乳膏进行经皮给药,以肉眼评分、He染色、扫描电镜、抗氧化因子作为评判指标,探究雷公藤甲素配伍川芎是否可以降低皮肤毒性。结果表明,雷公藤甲素单独给药7天后,肉眼观察可见皮肤出现明显红肿,显微镜下可见角质层脱落,表皮增厚,表皮细胞出现空隙,扫描电镜下观察表皮褶皱明显增多,角质层疏松出现孔穴样结构,皮肤匀浆中MDA含量显著增加,SOD、CAT和GSH活力降低,与川芎主要成分配伍后,肉眼可见轻微红肿,角质层变薄疏松,表皮出现裂痕,但总体较雷公藤甲素组有所改善,且显著逆转雷公藤甲素导致的MDA含量增加,SOD、CAT、GSH活力降低,具有显著差异。2.川芎配伍雷公藤甲素对药物渗透、细胞摄取及CYP450酶代谢的影响研究首先建立雷公藤甲素,川芎嗪、阿魏酸和混合探针底物的含量测定方法,经方法学考察精密度,稳定性等均较好,满足药物的含量测定需要。（1）川芎配伍雷公藤甲素对药物渗透的影响采用装有小鼠腹部皮肤的Franz扩散池对配伍前后药物透皮能力进行评价,体外透皮实验结果显示,雷公藤甲素配伍川芎主要成分后接收液中阿魏酸渗透量降低,较雷公藤甲素和川芎嗪变化明显,但均不具有显著性差异,猜测阿魏酸在皮肤内滞留量增大起到减毒作用,因此后续以皮肤细胞为对象进行细胞摄取实验,进一步探究细胞内配伍前后药物含量变化。（2）川芎配伍雷公藤甲素对细胞摄取的影响细胞摄取实验探究雷公藤甲素和川芎配伍前后的药物摄取特性,以单位蛋白摄取量作为指标,定量研究配伍前后细胞对药物的摄取量变化。结果显示雷公藤甲素与川芎主要成分配伍后,细胞内甲素含量降低,低浓度配伍时,阿魏酸含量增加,而透皮实验结果显示两者配伍前后接收液中药物浓度相差不大,可能是因为药物除细胞内渗透外,还可通过细胞间途径和附属物进行迁移。（3）川芎配伍雷公藤甲素对CYP450酶代谢的影响在对CYP450酶活性探究中,据文献中雷公藤甲素、川芎嗪、阿魏酸对CYP酶活性影响及酶在HaCaT细胞中表达含量,筛选酶种类为CYP2C9、CYP2B6、CYP2E1,对应探针药物为甲苯磺丁脲、依法韦仑、氯唑沙宗。以MTT实验中细胞存活率最大的混合探针浓度进行后续实验,通过对孵育时间的优化确定1h时各探针底物的代谢量基本达到最大值,采用“鸡尾酒”探针药物法,LC/MS-MS测定底物浓度,间接反应相关酶活性,结果表明,雷公藤甲素组降低CYP2C9酶活性,与文献报道一致,配伍川芎主要成分后,酶活性显著升高,而对于CYP2B6、CYP2E1酶活性,雷公藤甲素组、川芎组、配伍组均有促进作用,推测川芎主要成分对部分CYP450代谢酶的抑制和诱导引起的代谢过程改变可能是其降低雷公藤甲素所致皮肤毒性的关键。3.川芎配伍雷公藤甲素对HaCaT氧化损伤保护及对Nrf2/HO-1通路影响研究采用酶生化法测定给药后细胞中GSH、CAT、SOD和MDA含量,结果表明,雷公藤甲素可明显降低GSH、CAT活力,升高SOD、MDA含量,除SOD结果外,其余与动物实验一致,提示雷公藤甲素的皮肤毒性与细胞内氧化还原系统紊乱有关,配伍川芎主要成分后,可以通过抗氧化途径来拮抗雷公藤甲素毒性。PCR结果显示,各浓度条件下,雷公藤甲素组均能显著降低HO-1和Nrf2m RNA基因表达水平,与低浓度川芎主要成分配伍后,HO-1和Nrf2 m RNA基因表达水平有不同程度升高,其中Nrf2差异具有显著意义。Western blot结果表明,各浓度条件下,雷公藤甲素组均能显著降低HO-1和Nrf2蛋白表达水平,与中、高浓度川芎主要成分配伍后,HO-1表达降低,Nrf2蛋白表达水平有所升高,但无显著差异。结论:川芎主要成分可影响药物及酶代谢,并发挥抗氧化作用改善雷公藤甲素导致的皮肤氧化损伤,其作用机制可能是调控机体内有毒物质含量和部分CYP450酶活性,调节CAT、GSH等靶基因活性,促进Nrf2合成,发挥抗氧化作用,Nrf2/HO-1信号通路不是其主要解毒途径。