人巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）属于疱疹病毒科,全球血清阳性率约为83%。该病毒感染免疫健全人群后一般无明显症状或表现为亚临床症状,而感染免疫缺陷患者和器官移植患者可引起严重后果甚至导致死亡。HCMV具有严格的种属特异性,很难在实验动物中发生高水平复制,缺乏适合的动物模型导致其发病机制研究、疫苗和抗病毒药物研发极为受限。研究发现,内在免疫是一种在细胞水平起作用的先天性免疫,由被称为限制因子（Restriction factors,RFs）的细胞蛋白实现,是限制病毒在细胞中复制的重要因素。干扰素诱导蛋白16（Interferon inducible protein 16,IFI16）是一种RFs,具有识别和结合病毒DNA,通过下调转录相关因子和诱导干扰素的表达来抑制病毒的复制。在HCMV感染初期IFI16可作为病毒DNA传感器,识别并结合病毒DNA,在感染后期作为病毒基因转录的抑制因子,通过抑制病毒基因的转录进而抑制病毒的复制。树鼩是一种具有潜力的病毒感染模型,树鼩的生理特征,如解剖结构、神经和心理发育,与包括人类在内的灵长类动物高度相似,此外,还具有具有繁殖和生命周期短、繁殖力高、体型适中、容易喂食等优点。本论文课题组前期建立了HCMV感染树鼩原代真皮成纤维细胞（Tree Shrew dermis fibroblasts,TSDF）模型,发现HCMV能在TSDF中低水平复制。另外,不同于在鼠源细胞中的完全不感染和在人源细胞中的高水平复制,HCMV对其易感性与鼠源和人源成纤维细胞均有很大差异。本论文拟利用该细胞模型,通过转录组数据分析筛选易感性差异相关基因,KEGG和GO通路富集分析,结合现有的RFs,确定一个或多个RFs作为易感性差异相关候选基因。通过过表达和敲低表达候选基因检测该基因对病毒复制的影响,由此阐明HCMV对人包皮成纤维细胞（Human foreskin fibroblast,HFF）和TSDF易感性差异机制,为HCMV树鼩动物模型建立提供理论基础。本研究首先对TSDF的分离培养体系进行优化,利用改进后的方法可获得12代以内稳定传代的TSDF。转录组数据分析和验证,确定IFI16为易感性差异相关候选基因。随后本研究构建了携带人IFI16（h IFI16）基因、树鼩IFI16（t IFI16）基因和病毒ul83基因的表达载体,在A549细胞中,过表达h IFI16和t IFI16基因引起HCMV复制水平显著降低,而过表达病毒ul83基因能部分缓解h IFI16对HCMV复制的抑制,但不能缓解t IFI16基因对病毒复制的抑制作用。该结果提示IFI16可能是限制HCMV在TSDF中复制的一个关键因子。进一步构建了敲低表达t IFI16基因的重组腺病毒Ad5-sh RNA t IFI16和阴性对照病毒Ad5-NC,经过q RT-PCR验证该重组病毒可下调TSDF中t IFI16基因m RNA水平,而对照病毒不影响该基因表达水平。分别用HCMV感染HFF、t IFI16基因表达正常的TSDF以及t IFI16基因敲低表的TSDF,结果发现,与t IFI16基因表达正常的TSDF相比,敲低表达t IFI16基因可引起CPE比例、GFP阳性率、病毒DNA复制水平和培养上清中子代病毒滴度显著上升,但是与HCMV感染HFF相比,所有指标均还有显著差距。该结果表明敲低表达t IFI16基因可在显著增加HCMV对TSDF的易感性。综上所述,本研究优化了TSDF分离培养方法,通过转录组数据分析和基因过表达和敲低表达实验发现t IFI16是限制HCMV在TSDF和HFF中的复制的关键因子,为t IFI16抑制HCMV复制机制的深入探究提供了线索,为HCMV跨种感染树鼩动物模型的建立及树鼩资料的利用开发提供了理论参考。