本文以AKR₁C₂（Aldo-Keto Reductase Ⅰ CⅡ）序列（AB02165）为信息探针，利用生物信息学同源筛选的方法，拚接其全长序列，对其结构与功能进行预测。以乙型肝炎病毒（HBV）感染、黄曲霉毒素B₁（AFB₁）污染、P53基因高度突变为主因的启东高发区肝癌患者（共170例）及启东肝癌细胞株QGY7703为研究对象，以AKR₁C₂为目标基因，参照生物信息学模拟分析结果，借助分子细胞生物学手段，如RT-PCR、Northern blot、Southern blot、western blot、5’、3’-RACE、PCR-SSCP、直接序列分析、免疫组化、原位杂交、多克隆抗体的制备、真核转染、基因框移突变的构建、体内外致瘤能力测定、基因表达芯片、反义基因转染、免疫共沉淀、酵母双杂交等，对AKR₁C₂基因在启东肝癌及其癌旁组织中的突变、表达特征及其致肝癌机制进行研究。 本研究中RACE分析结果显示：AKR₁C₂ cDNA全长序列为1865bp，5’非编码序列为253bp，3’非编码序列为640bp，起始密码子为ATG，终止密码子为TAA，开放阅读框（ORF）为972bp。所扩增的长度为的985bp的AKR₁C₂基因的片段（以ORF设计引物），用同位素掺入标记做为杂交探针，与印有36种人类组织mRNA的MTN膜进行Northern杂交。结果显示人类AKR₁C₂基因的表达谱：心、胎盘、直肠、肝、骨骼肌、卵巢、前列腺、大肠、盲肠、胸腺、睾丸、附睾、输卵管、盲肠、鼻、乳房、胃组织中AKR₁C₂中均检出一种大约为1.9kb的剪接本，在毛发组织中检出一种大约为1.2kb的剪接本。在肝脏、前列腺、大肠、盲肠、附睾、输卵管中表达远远高于其它组织，即存在一定的组织表达特异性。迭加AKR1C2-GFP及抗-线粒体荧光染色结果，显示其定位于线粒体膜上。AKR₁C₂ cDNA原核表达产物经变性、复性、纯化后，确定为42Ku，其等电点为7.5，并经Western blot、等电聚焦凝胶电泳证实。免疫兔后产生的抗体滴度为1:10000（ELISA测定）。抗血清纯化后，以l:2000，1:4000，l:5000稀释，经Western blo七证实该抗体在42Ku处出现一条带。为了检测AKR:CZ蛋白在人不同肿瘤细胞系中的表达情况，选取人食管癌细胞系EC8712、人前列腺癌细胞系DU一450和TSU一pZ、人结肠癌细胞系HR8348、人肝癌细胞系BEL74OZ、人肝癌细胞系QGY7703、人肺腺癌细胞系GLC⁸2和LTEP一aZ，并经常规培养后提取其蛋白。Western blot分析表明，在42Ku处出现印迹带。人前列腺癌细胞系TSU一pZ、人前列腺癌细胞系DU一450、人肺腺癌细胞系GLC一82、人食管癌细胞系EC8721中表达较高，人肝癌细胞系QGY77O3中表达较低。显示在不同肿瘤细胞系中AKRICZ蛋白表达存在一定差异。 直接序列分析显示，肝癌及其癌旁组织中AKR:CZ cDNA存在一定序列差异，包括颠换、转换、插入或缺失现象，从而导致错义或无义突变。PCR一SSCP一银染技术检测了20例人肝癌组织中AKR;CZ的变突情况。发现肝癌中AKR，CZ基因突变率为25.0%。Northern blot显示肝癌中AKRICZ基因91.2%（124/136）为上调表达，8.8%（16/136）为下调表达（P（0.05）.原位杂交显示150例肝癌中，138例（92.0%）肝癌中AKRLCZmRNA为上调表达，12例（8.0%）肝癌中AKRICZmRNA为下调表达，肝癌细胞浆中AKRICZmRNA信号（El:0，95士0.16）强于癌旁组织（表达指数El:0.15士0.01）及正常肝组织（0.12士0.2）（P（0.01）.RT一PCR显示，85例（88.6%）肝癌中AKRICZ基因为上调表达，n例（n .4%）肝癌中AKRICZ基因为下调表达，肝癌中表达水平为0.81士 0.15，显著高于癌旁肝组织0.43士0.10，P<0.001.western blot显示:100例肝癌中，89例均可见明显差异条带，检出率为89%，均显示上调表达，而癌旁肝组织除3例外均未见清晰条带，检出率为3%.10例良胜肝病变组织及8例正常肝组织中均未见条带.免疫组化结果显示:150例肝癌中，145例（96.7%）肝癌中AKR，C卯RNA为上调表达，5例（3 .3%）肝癌中AKR;CZmRNA为下调表达，AKRICZ的表达主要见于肝（癌）细胞的胞浆，呈颗粒状分布，在细胞核中偶见表达。150例肝癌中，肝癌及其癌旁组织中标记指数（L工）分别为95.7士n.7，12.6士6.5（p<0.01）.AKR心2基因在转录与翻译水平上与肝癌临床病理特征间在相关性:1）在复制与转录水平上，AKRtCZ mRNA表达水平与肝癌分级及门静脉癌栓有关即m-IV级肝癌中表达高于I一n级肝癌（P<0 .05），有门静脉癌栓者高于无癌栓者 （P<O.05）。AKR瓜cDNA在肝癌包膜不完整及有肝内转移的肝癌组织中表达高于包膜完整及无转移者，而在不同甲胎蛋白水平、不同肿瘤大小及伴有不同程度肝硬化的肝癌组织中AKRICZ基因水平无显著性差异.2）在翻译水平上，AKR:CZ蛋白表达与术后复发密切相关，AKR，CZ在复发患者中标记指数LI（下70）高于非复发患者（n二80）( 97.1士16.3对25.3士11.7，P（0.001）.AKR，CZ蛋白在250例肝癌及癌旁组织中表达与肝癌大小、血清HBsAg、肝硬化无关（P>0 .05）。但与分化程度 (P（0.01）、包膜侵犯(P（0.01）、AFP(P（0.05）、AR(P（0.01）、ER(P（0.01）P53突变(P（0.01）、肝内转移(P（0.01）、l隋床分期（尸<0.01）、癌旁卫星灶(P（0.01）密切相关。AKR;CZ蛋白表达与肝癌分级及门静脉癌栓形成有关，即m一W级肝癌AKRICZ蛋白的表达水平明显高于I一11级肝癌，有