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目的:本研究选取雄黄单药,通过影响端粒蛋白POT1、TRF1、TRF2的表达,探讨其对端粒动力学的调节作用,为药物靶向用于急性单核细胞白血病的治疗寻求实验学支持,以期为研制治疗急性单核细胞白血病的临床新型药物提供理论支持。方法:1.体外实验:(1)培养THP-1细胞株。(2)CCK-8法检测不同浓度、不同时间点雄黄作用于THP-1细胞影响其体外生长的作用,并明确其IC50值。(3)Annexin V/PI双染法FCM检测细胞凋亡情况;PI单染法FCM检测细胞周期分布情况。(4)Western-blot检测POT1、TRF1、TRF2蛋白表达水平。(5)实时定量PCR检测用药组POT1、TRF1、TRF2-m RNA表达。2.体内实验:(1)以THP-1细胞株作用于NOD/SCID小鼠为实验平台,给予雄黄灌胃干预。(2)观察小鼠给药后反应,濒死小鼠组织行病理学方面检查。(3)给药3周后处死小鼠,取脾细胞悬液采用流式细胞术检测细胞凋亡率及分析细胞周期改变;免疫组化检测POT1、TRF1、TRF2蛋白表达的改变情况。结果:1.体外实验:(1)CCK-8法示雄黄对THP-1细胞具有阻碍增殖作用,呈现出浓度、时间相关性。雄黄作用THP-1细胞48h的IC50值为0.023 mg/ml。因此我们采取作用48h的中剂量浓度0.015 mg/ml(低于IC50值)进行实验。(2)作用48h后,THP-1细胞的细胞凋亡率及G1期停滞率与对照组比较均明显增高,差异具有统计学的意义。(3)Western-blot检测蛋白在细胞膜上的表达,结果表明,雄黄组与对照组比较可出现THP-1细胞的POT1、TRF1表达增加,TRF2表达减少,有显著性差异。(4)实时定量PCR检测基因表达,基因表达结果与Western-blot蛋白表达结果改变相同,提示雄黄可能通过基因转录水平影响蛋白表达。2.体内实验:建立THP-1/NOD-SCID小鼠模型,雄黄能明显延长模型小鼠的寿命(P<0.01),免疫组化结果显示POT1、TRF1蛋白表达与对照组比较均升高,TRF2蛋白表达与对照组比较降低,与体内试验结果一致。结论:我们所选用的雄黄单药在体内和体外实验研究中表现出一定程度的抗癌活性,为其作为肿瘤治疗作用的靶点提供实验理论依据。