蛋白质磷酸化是一种重要的翻译后修饰,它调节着细胞的信号传导、细胞分化、细胞生长、细胞凋亡等几乎所有的生命活动,也被形象地描述为细胞生理活动的开关。目前已知有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。因此,对蛋白质磷酸化的研究有助于全面理解蛋白质的各项功能及机理。蛋白质磷酸化的研究方法是先将蛋白质酶解,然后利用质谱对磷酸肽的氨基酸序列和磷酸化位点进行准确地鉴定。但磷酸肽的离子化效率差,而且非磷酸肽的存在也抑制磷酸肽的质谱信号,这些原因导致利用质谱直接对磷酸肽进行分析面临很大困难。因此在质谱分析前需要对磷酸肽进行特异性富集。本论文成功合成了树状聚合物-硅胶固相载体材料,利用固定金属离子亲和色谱技术对树状聚合物-硅胶固相载体材料的表面修饰固定Ti4+离子,固定金属离子亲和色谱技术是通过键合在鳌合底物上的金属离子特异性地与磷酸化肽相结合,并且在高pH中可以释放出磷酸化肽,从而实现其与非磷酸化肽的分离,由于树状聚合物的表面是多枝状结构,且含有大量的氨基,氨基吸附Ti4+具有很好的稳定性,并考察了其对磷酸肽的富集效果。利用标准磷酸化蛋白P-casein对其富集效率进行评价。实验中对富集条件进行优化,上样液中有机溶剂的浓度为50%的乙腈、酸的种类为三氟乙酸、浓度为0.1%、清洗次数为1次和洗脱液为0.4mol/L氨水,结果表明此方法对磷酸肽有较高的选择性,且检测限达到10-9mol/L。模拟复杂的生物样品,利用β-casein与BSA摩尔比为1：100的混合酶切溶液,考察了Ti4+-树状聚合物-硅胶材料的选择性。在优化的实验条件下,将所建立的富集条件和质谱鉴定方法用于牛奶样品中磷酸肽的富集和分析,鉴定到的牛奶中磷酸肽的序列覆盖率100%。结果表明,Ti4+-树状聚合物-硅胶材料对磷酸肽的分离富集具有很好的效果。