基于树状高分子的生物样品中磷酸肽检测研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lansekafei4271
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
蛋白质磷酸化是一种重要的翻译后修饰,它调节着细胞的信号传导、细胞分化、细胞生长、细胞凋亡等几乎所有的生命活动,也被形象地描述为细胞生理活动的开关。目前已知有许多人类疾病是由于异常的磷酸化修饰所引起,而有些磷酸化修饰却是某种疾病所导致的后果。因此,对蛋白质磷酸化的研究有助于全面理解蛋白质的各项功能及机理。蛋白质磷酸化的研究方法是先将蛋白质酶解,然后利用质谱对磷酸肽的氨基酸序列和磷酸化位点进行准确地鉴定。但磷酸肽的离子化效率差,而且非磷酸肽的存在也抑制磷酸肽的质谱信号,这些原因导致利用质谱直接对磷酸肽进行分析面临很大困难。因此在质谱分析前需要对磷酸肽进行特异性富集。本论文成功合成了树状聚合物-硅胶固相载体材料,利用固定金属离子亲和色谱技术对树状聚合物-硅胶固相载体材料的表面修饰固定Ti4+离子,固定金属离子亲和色谱技术是通过键合在鳌合底物上的金属离子特异性地与磷酸化肽相结合,并且在高pH中可以释放出磷酸化肽,从而实现其与非磷酸化肽的分离,由于树状聚合物的表面是多枝状结构,且含有大量的氨基,氨基吸附Ti4+具有很好的稳定性,并考察了其对磷酸肽的富集效果。利用标准磷酸化蛋白P-casein对其富集效率进行评价。实验中对富集条件进行优化,上样液中有机溶剂的浓度为50%的乙腈、酸的种类为三氟乙酸、浓度为0.1%、清洗次数为1次和洗脱液为0.4mol/L氨水,结果表明此方法对磷酸肽有较高的选择性,且检测限达到10-9mol/L。模拟复杂的生物样品,利用β-casein与BSA摩尔比为1:100的混合酶切溶液,考察了Ti4+-树状聚合物-硅胶材料的选择性。在优化的实验条件下,将所建立的富集条件和质谱鉴定方法用于牛奶样品中磷酸肽的富集和分析,鉴定到的牛奶中磷酸肽的序列覆盖率100%。结果表明,Ti4+-树状聚合物-硅胶材料对磷酸肽的分离富集具有很好的效果。
其他文献
通过对影响中小企业融资需求与资本结构选择的特征因素进行逻辑分类,通过样本选择来控制一定层面的特征因素,进而对中小企业融资需求与资本结构选择进行一般性研究。研究发现
发达国家发展理念变迁和工业化的历程表明,合理的资源税体系有利于促进资源高效利用、加快转变发展方式。我国开征资源税已有30年的历史,资源税体系随着我国发展理念的变迁先
从现实看,农民土地使用权尚未充分发挥增加农民财产性收入的重要功能。农民土地使用权是物权而不是债权,是农民最重要、最大的财产权。赋予农民更多财产权利,需要加快农村土
冲突会话在日常生活中频繁发生,是一种复杂且不可避免的语言现象。广义上,冲突话语指一种言语行为或言语事件,如反对、反驳、争论、争执、争吵等。其表现为交际的一方反对另
近年来,附加于基本险品种之上的保险品种越来越多样化,而由于附加险的短期性特点,保险公司往往以合同条款约定对附加险进行续保的条件和方式,由附加险续保问题引发的保险纠纷,也越
在当今讲究潮流和追求个性的时代,针织袜品被称为“足部的时装”,已不仅局限在保暖舒适的传统范畴。人们对针织袜品的花色以及款式的要求越来越高,袜子作为一种服饰品其设计
目的:探讨前列腺基底细胞癌(basal cell carcinoma of prostate)的发生、临床病理特点、病理诊断、鉴别诊断以及治疗和预后。方法:运用HE染色及免疫组化染色对5例前列腺基底
<正>9月16日,农业部和陕西省人民政府在眉县启动建设国家级眉县猕猴桃批发市场。农业部副部长陈晓华指出,要采取切实措施,积极支持国家级农产品专业市场建设,创造性地开展工
富硒发芽糙米是在糙米发芽过程中添加亚硒酸钠溶液,使糙米在发芽的同时进行富硒所得到的糙米制品。富硒发芽糙米与精白米比较,保留了稻米的大部分的营养物质。在发芽过程中,