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第一部分TRAIL对胃癌细胞作用效应及其抗肿瘤机制的研究目的:评价TRAIL对胃癌细胞株SGC-7901的生物学行为影响并探索相关的作用机制。方法:常规培养胃癌SGC-7901细胞株,分别采用浓度为100μg/L、200μg/L、500μg/L的TRAIL干预12h、24h、48h作为实验组,对照组为未干预的胃癌细胞株SGC-7901,MTT法和TUNEL染色法分别检测细胞增殖和凋亡,Transwell法检测细胞侵袭、迁移,Western blot检测细胞细胞Survivin、NF-κB表达。结果:相较于对照组,TRAIL处理组细胞的增殖活性显著降低(p<0.05),并且细胞的增殖活性出现时间和浓度依赖的活性抑制。另外,在细胞凋亡、细胞侵袭及细胞迁移等指标上,也观察到TRAIL处理组细胞会随着时间和浓度的增加而出现凋亡增加、侵袭减少和迁移减少的现象(全部p<0.05)。在对机制的探索上,我们的结果显示,TRAIL干预组细胞Survivin和NF-κB的表达相较于对照组有显著的降低,而且这种降低会出现对时间和浓度的依赖性(P<0.05)。结论:TRAIL能够通过影响Survivin和NF-κB水平来影响胃癌细胞株SGC-7901的增殖、凋亡、侵袭及迁移等生物学行为。第二部分TRAIL对胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR中耐药基因表达的影响目的:本部分研究的目的在于明确TRAIL对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中相关耐药基因(包括MDR1、DAPK1和DAPK2)表达水平的影响,从而为胃癌化疗耐药的研究提供新的见解。方法:胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR与系列浓度的TRAIL(50、100、200、400μg/m L)培养48 h,对照组为未干预的胃癌细胞株SGC7901/VCR,实时定量PCR检测不同处理组胃癌耐药细胞株耐药基因MDR1、DAPK1和DAPK2转录水平的表达,同时通过酶联免疫吸附法检测不同处理组胃癌耐药细胞株耐药基因相关蛋白P-gp、DAPK1和DAPK2的表达含量。两组和多组间耐药基因m RNA及蛋白水平的比较分别采用Student t检验及方差检验进行。结果:在TRAIL浓度为200μg/m L时细胞的增殖活性为90%,我们将该浓度定位起效浓度。不同浓度的TRAIL(100-500μg/m L)干预后,胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR中耐药基因MDR1、DAPK1和DAPK2 m RNA的水平会随着TRAIL的浓度升高而出现降低的现象;类似地,胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR中耐药基因相关蛋白P-gp、DAPK1和DAPK2蛋白的水平也会随着TRAIL浓度的升高而降低,并且这种耐药基因和蛋白水平的降低具有TRAIL浓度依赖性的特点。结论:TRAIL能够以浓度依赖的特征抑制胃癌细胞株SGC7901/VCR中耐药基因MDR1、DAPK1和DAPK2基因及相应P-gp、DAPK1和DAPK2蛋白的表达。关键词:TRAIL;胃癌耐药;MDR1;DAPK1、DAPK2第三部分TRAIL联合多西他赛对胃癌细胞株SGC-7901/VCR作用效应及相关机制的研究目的:评价合适浓度的TRAIL及起效浓度的多西他赛化疗药对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的作用效应及相关机制的研究。方法:运用MTT法检测不同浓度的TRAIL(50、100、200、400μg/m L)和多西他赛(0、0.625、1、2.5、5、10μg/m L)情况下胃癌耐药SGC7901/VCR的增殖活性的变化规律,从而明确TRAIL及多西他赛的起效浓度。将细胞采用TRAIL和多西他赛处理后,通过Annexin V-PI染色检测联合处理对细胞凋亡的影响。在机制分析部分,通过将细胞采用TRAIL和多西他赛联合处理后,采用实时定量PCR及酶联免疫吸附法分别检测耐药基因MDR1 m RNA及耐药蛋白P-gp的表达水平的变化。结果:在多西他赛浓度为0.6μg/m L时细胞的增殖活性为90%,我们将多西他赛的起效浓度定义到该浓度。当TRAIL和多西他赛浓度分别为200μg/m L TRAIL及0.6μg/m L的情况下,流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示联合处理相较于单独处理细胞凋亡的水平显著下降。在机制分析的结果上,实时定量PCR及酶联免疫吸附法的结果显示当TRAIL和多西他赛浓度分别为200μg/m L TRAIL及0.6μg/m L的情况下,联合处理组相较于TRAIL和多西他赛单独处理组,细胞耐药基因MDR1的m RNA及蛋白P-gp的水平会显著下降(全部p<0.05)。结论:联合适量浓度的TRAIL及多西他赛可能通过影响耐药基因MRD1 m RNA及相应的蛋白形式P-gp来对胃癌耐药细胞株SGC7901/VCR实现化疗耐药的逆转效应的。