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姜黄素(Curcumin,CUR)是一种提取于姜科姜黄属植物根茎的脂溶性多酚类物质。姜黄素具有很好的护肝效应,可降低酒精、四氯化碳、硫代乙酰胺等各种化学药物引起的肝损伤。但是,姜黄素的水溶性及生物利用度极低,这大大地限制了其在酒精性肝损伤防治方面的应用。因此,本研究利用β-环糊精聚合物(β-cyclodextrin polymer,CDP)作为载体,通过超分子化学作用制备得到了水溶性和抗氧化活性良好的CUR/CDP。本研究通过建立乙醇损伤LO2细胞模型以及小鼠酒精性肝损伤模型考察CUR/CDP改善酒精性肝损伤的作用机制,为其在保护酒精性肝损伤中的应用提供理论依据。主要研究结果如下:(1)通过MTT法探究乙醇诱导LO2细胞损伤的作用浓度与时间,从而建立乙醇诱导LO2细胞损伤模型,通过MTT法检测CUR/CDP对乙醇诱导LO2细胞损伤的影响,然后对LO2细胞的培养液和细胞中相关指标进行检测,从而评价CUR/CDP对乙醇诱导LO2细胞损伤的保护作用。结果显示,乙醇诱导LO2细胞损伤的作用浓度以及作用时间分别为600 mmol/L和6 h,经CUR/CDP(80μg/m L)处理后,LO2细胞的细胞活力从(54.75±8.97)%(乙醇处理组)提高到(85.27±2.64)%,且细胞培养液中ALT、AST和LDH活力分别从(26.47±0.90)U/L、(41.02±4.41)U/L、(63.77±4.95)U/L(乙醇处理组)降低到(16.17±0.42)U/L、(22.62±0.79)U/L、(32.25±1.69)U/L(P<0.05),LO2细胞内GSH-PX、SOD活力分别从(21.82±1.34)U/mgprot、(8.45±1.11)U/mgprot(乙醇处理组)升高到(36.70±0.56)U/mgprot、(16.47±1.27)U/mgprot,LO2细胞内MDA和ROS含量分别从(1.19±0.15)nmol/mgprot、(198.02±11.76)%(乙醇处理组)降低到(0.72±0.05)nmol/mgprot、(110.87±10.22)%(P<0.05)。因此,CUR/CDP通过提高LO2细胞相关抗氧化酶的活力和降低细胞内ROS含量来改善乙醇诱导LO2细胞的损伤。(2)通过流式细胞术、Western blot技术和DCFH-DA荧光检测技术评价CUR/CDP改善乙醇诱导LO2肝细胞损伤的作用机制。结果表明,乙醇能显著提高细胞内G2/M期细胞数目,从空白对照组的(8.83±0.46)%提高到(21.86±0.13)%。而经80μg/m L CUR/CDP预处理后乙醇诱导的细胞损伤显著降低,发现其细胞内G2/M期细胞数目从乙醇处理组的(21.86±0.13)%降低到(4.76±0.36)%。进一步研究发现,CUR/CDP能够显著下调乙醇处理组中的p21、p-ATM、p-p53、γ-H2AX以及p-p38MAPK的蛋白表达量和上调cyclin B1和p-MDM2的蛋白表达量。此外,CUR/CDP作用于细胞后其细胞内DCFH-DA的荧光强度显著减弱,表明CUR/CDP能够抑制乙醇诱导细胞内ROS的产生。因此,CUR/CDP通过抑制细胞内ROS的产生下调细胞内与DNA损伤相关蛋白的表达,从而改善乙醇诱导的肝细胞损伤。(3)通过建立小鼠酒精性肝损伤模型,对小鼠血清以及肝脏中相关指标进行检测以及HE染色和Western blot技术来评价CUR/CDP对小鼠急性酒精性肝损伤的保护效果及作用机制。结果显示,与阴性对照组相比,模型对照组小鼠的肝脏系数显著上升(P<0.05),表明小鼠酒精性肝损伤模型成功建立。而经CUR/CDP保护后,小鼠的肝脏系数从模型对照组的(5.62±0.40)%降低到CUR/CDP高剂量组的(4.96±0.49)%,且小鼠血清中ALT、AST和LDH活力分别从(23.09±3.01)U/L、(28.98±4.74)U/L和(8048.47±532.91)U/L(模型对照组)降低到(15.22±2.35)U/L、(18.42±3.87)U/L和(6143.13±305.65)U/L(P<0.05),LO2细胞内GSH-PX、SOD活力分别从(142.15±16.46)U/mgprot、(293.69±37.48)U/mgprot(模型对照组)升高到(243.87±18.34)U/mgprot、(400.24±27.99)U/mgprot,而MDA含量从模型对照组的(2.26±0.20)nmol/mgprot(模型对照组)降低到(1.78±0.10)nmol/mgprot。HE染色结果表明,与模型对照组相比,CUR/CDP各剂量组中小鼠的肝脏组织的损伤程度明显减轻,且肝脏组织的损伤程度与CUR/CDP的剂量呈浓度依赖性。经过CUR/CDP保护之后,逐渐下调了p-ATM、γ-H2AX、p21、p-p53和p38MAPK的表达量,上调了p-MDM2和cyclin B1的表达量。上述结果表明,CUR/CDP通过提高小鼠肝脏相关抗氧化酶的活力和抑制DNA损伤来改善小鼠肝脏细胞因乙醇造成的G2/M期细胞周期阻滞,从而改善乙醇诱导的酒精性肝损伤。