果蝇复眼发育过程中最初R8位置决定原理的初步探讨

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果蝇的小眼发育一直被当做研究神经先分化,细胞命运决定,细胞之间的交流等方面的经典模型。每一只完整的果蝇复眼都是由750-800个相对独立的小眼通过有规律的分化完成,形成非常规律的六边形周期排布图式。每个小眼位置是通过单一R8感光细胞来决定的。在决定过程中需要一些精细的调控限制机制,各基因之间的相互关系,形成素的动力学特征,使唯一的一个R8前体细胞能够在大约15个都表达前神经基因ato的细胞中被选择出来。目前已的许多模型都不能完整的解释这个过程。在以往的研究中的一些用于监测基因表达以及功能的手段,如添加荧光蛋白标签等,都是通过过表达来完成的,不能真实反映内源基因的表达情况。因此,我们迫切需要一些手段来直接监测内源基因的表达。为了解决这一问题,我们选择了R8决定过程中一些关键基因,如ato,sca,Delta,rough等,并在内源基因组上对其进行操作,通过利用基因打靶技术和MiMIC同源重组系统等转基因的方法,将两端带有果蝇MHC RNA剪接位点的荧光蛋白标签定点敲入目的基因内含子,构建了一系列带有高保真的内源报告基因的转基因果蝇品系。通过与内源基因免疫染色共定位,确定了我们的报告基因可以很好的用于检测这些基因在R8决定过程中的表达。同时,我们利用温度敏感行的等位基因,建立了一套热激恢复模型,用于观察大面积扰动之后眼盘的发育情况,通过对Nts以及D1ts的热激后处理后我们观察到,这种N信号扰乱带来的额外的R8现象是可以恢复的。此外,我们还利用嵌合体技术,对R8决定过程中涉及到的信号通路以及相关因子,如Notch信号通路、Hh信号通路,Dpp信号通路等进行克隆操作,构建了一套基于克隆的恢复模型,用与研究局部小范围的扰动对整个眼盘发育过程的影响。这些系统对于果蝇复眼R8决定的进一步研究有着重要的意义,同时也可以运用于其他相关课题的研究。
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