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背景和目的
胃癌(Gastric cancer, GC)是世界上发病率和死亡率处于第五位和第三位的恶性肿瘤，死亡率较高。由于早期诊断率低，许多患者诊断时已为晚期。目前，胃癌的标准治疗方法包括手术、化疗和放疗。对于晚期胃癌患者，化疗仍是主要治疗手段之一。然而，肿瘤细胞对化疗药物产生抗性，最终导致化疗失败。然而，胃癌细胞耐药的分子机制目前并不十分清楚。
微小RNA(microRNA, miRNA)是一种单链、长度为19-23个核苷酸的非编码RNA。miRNA可以部分或完全结合靶mRNA的3UTR，导致翻译抑制或靶mRNA降解。miRNA参与人体中超过30％编码基因的转录后调节，涉及广泛的生物过程，包括信号转导、细胞增殖、细胞分化和凋亡。此外，异常的miRNA表达与肿瘤增殖、侵袭和转移有关。因此，miRNA可以作为诊断和预后的标志物，并作为肿瘤治疗的新靶点。此外，miRNA还参与与不同类型肿瘤(包括卵巢癌和乳腺癌)中的化疗抗性的产生。然而，miRNA在胃癌化疗耐药中的作用及机制研究尚未不明确。
第一部分：miR-3622b-5p在获得性耐药的胃癌病人血浆及耐药的胃癌细胞株中的表达
方法：
运用Real-timePCR法分析miR-3622b-5p在未化疗的胃癌病人血浆及配对的获得性耐药的胃癌病人血浆、亲本胃癌细胞株及顺铂耐药的胃癌细胞株中的表达情况。
结果：
1.与未化疗的胃癌病人相比，miR-3622b-5p在获得性耐药的胃癌病人血浆中的表达水平显著降低。
2.与亲本胃癌细胞株SGC7901相比，miR-3622b-5p在顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中的表达水平显著降低。
第二部分：miR-3622b-5p对胃癌细胞耐药性的影响
方法：
1.通过MTT实验分析瞬时转染miR-3622b-5p模拟物和抑制剂对胃癌细胞及顺铂耐药胃癌细胞株耐药性的影响。
2.运用流式细胞术检测瞬时转染miR-3622b-5p模拟物和抑制剂对顺铂耐药胃癌细胞株及亲本细胞株凋亡的影响。
结果：
1.MTT实验结果测定显示，与转染miRNA模拟物的对照相比，瞬时转染miR-3622b-5p模拟物能够显著降低顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP对顺铂(DDP)的耐受性；反之，与转染miRNA抑制剂对照相比，瞬时转染miR-3622b-5p抑制剂可以显著提高亲本胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性。
2.流式细胞仪凋亡检测结果显示，瞬时转染miR-3622b-5p模拟物能够显著增加顺铂诱导的胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的凋亡；反之，瞬时转染miR-3622b-5p抑制剂则能显著降低顺铂诱导的亲本胃癌细胞株SGC7901的凋亡。
第三部分：miR-3622b-5p参与调节胃癌耐药的分子机制
方法：
通过在线的生物信息学网站预测miR-3622b-5p的靶基因；荧光素酶实验验证BIRC5是否为miR-3622b-5p的靶基因；免疫组化检测BIRC5在弥漫型胃癌组织及肠型胃癌组织的蛋白表达水平；用免疫印迹(Western blot)及免疫荧光两种方法分别检测BIRC5在胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP及亲本胃癌细胞株SGC7901的表达情况；免疫印迹(Western blot)检测瞬时转染miR-3622b-5p模拟物和抑制剂后顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP及亲本胃癌细胞SGC7901中miR-3622b-5p的靶基因BIRC5蛋白的表达水平变化。
结果：
1.生物信息学预测结果表明BIRC5可能是miR-3622b-5p潜在的靶基因；荧光素酶报告基因实验结果显示，BIRC5是miR-3622b-5p靶基因。
2.免疫组织化学检测结果显示，BIRC5在4个样本中显著高表达，包括2个弥漫型胃癌组织和2个肠型胃癌组织。
3.Westernblot及免疫荧光显示BIRC5在顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP明显高于亲本胃癌细胞株SGC7901。
3.Westernblot实验显示，瞬时转染miR-3622b-5p模拟物后，顺铂耐药胃癌细胞SGC7901/DDP中的BIRC5蛋白表达水平显著下调;与之相反，瞬时转染miR-3622b-5p抑制剂后，亲本胃癌细胞SGC7901的BIRC5蛋白水平显著上调，证明了miR-3622b-5p可能靶向调控BIRC5蛋白的表达来调节胃癌细胞的耐药。
结论：
与未化疗胃癌病人相比，miR-3622b-5p在获得性耐药胃癌患者血浆中显着下调；与亲本SGC7901细胞相比，miR-3622b-5p在顺铂耐药胃癌细胞系SGC7901/顺铂(DDP)中显着下调。过表达miR-3622b-5p能提高顺铂耐药胃癌细胞系SGC7901/DDP对顺铂的敏感性；与此相反，下调miR-3622b-5p则提高亲本胃癌细胞株SGC7901对顺铂的耐药性。荧光素酶报告基因实验结果表明BIRC5是miR-3622b-5p的靶基因。转染外源性miR-3622b-5p能显著下调胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP细胞中BIRC5的表达并提高耐药细胞对顺铂(DDP)的敏感性；相反，转染外源性miR-3622b-5p抑制剂显著上调了BIRC5的蛋白表达并降低亲本胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性。
胃癌(Gastric cancer, GC)是世界上发病率和死亡率处于第五位和第三位的恶性肿瘤，死亡率较高。由于早期诊断率低，许多患者诊断时已为晚期。目前，胃癌的标准治疗方法包括手术、化疗和放疗。对于晚期胃癌患者，化疗仍是主要治疗手段之一。然而，肿瘤细胞对化疗药物产生抗性，最终导致化疗失败。然而，胃癌细胞耐药的分子机制目前并不十分清楚。
微小RNA(microRNA, miRNA)是一种单链、长度为19-23个核苷酸的非编码RNA。miRNA可以部分或完全结合靶mRNA的3UTR，导致翻译抑制或靶mRNA降解。miRNA参与人体中超过30％编码基因的转录后调节，涉及广泛的生物过程，包括信号转导、细胞增殖、细胞分化和凋亡。此外，异常的miRNA表达与肿瘤增殖、侵袭和转移有关。因此，miRNA可以作为诊断和预后的标志物，并作为肿瘤治疗的新靶点。此外，miRNA还参与与不同类型肿瘤(包括卵巢癌和乳腺癌)中的化疗抗性的产生。然而，miRNA在胃癌化疗耐药中的作用及机制研究尚未不明确。
第一部分：miR-3622b-5p在获得性耐药的胃癌病人血浆及耐药的胃癌细胞株中的表达
方法：
运用Real-timePCR法分析miR-3622b-5p在未化疗的胃癌病人血浆及配对的获得性耐药的胃癌病人血浆、亲本胃癌细胞株及顺铂耐药的胃癌细胞株中的表达情况。
结果：
1.与未化疗的胃癌病人相比，miR-3622b-5p在获得性耐药的胃癌病人血浆中的表达水平显著降低。
2.与亲本胃癌细胞株SGC7901相比，miR-3622b-5p在顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP中的表达水平显著降低。
第二部分：miR-3622b-5p对胃癌细胞耐药性的影响
方法：
1.通过MTT实验分析瞬时转染miR-3622b-5p模拟物和抑制剂对胃癌细胞及顺铂耐药胃癌细胞株耐药性的影响。
2.运用流式细胞术检测瞬时转染miR-3622b-5p模拟物和抑制剂对顺铂耐药胃癌细胞株及亲本细胞株凋亡的影响。
结果：
1.MTT实验结果测定显示，与转染miRNA模拟物的对照相比，瞬时转染miR-3622b-5p模拟物能够显著降低顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP对顺铂(DDP)的耐受性；反之，与转染miRNA抑制剂对照相比，瞬时转染miR-3622b-5p抑制剂可以显著提高亲本胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性。
2.流式细胞仪凋亡检测结果显示，瞬时转染miR-3622b-5p模拟物能够显著增加顺铂诱导的胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP的凋亡；反之，瞬时转染miR-3622b-5p抑制剂则能显著降低顺铂诱导的亲本胃癌细胞株SGC7901的凋亡。
第三部分：miR-3622b-5p参与调节胃癌耐药的分子机制
方法：
通过在线的生物信息学网站预测miR-3622b-5p的靶基因；荧光素酶实验验证BIRC5是否为miR-3622b-5p的靶基因；免疫组化检测BIRC5在弥漫型胃癌组织及肠型胃癌组织的蛋白表达水平；用免疫印迹(Western blot)及免疫荧光两种方法分别检测BIRC5在胃癌顺铂耐药细胞株SGC7901/DDP及亲本胃癌细胞株SGC7901的表达情况；免疫印迹(Western blot)检测瞬时转染miR-3622b-5p模拟物和抑制剂后顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP及亲本胃癌细胞SGC7901中miR-3622b-5p的靶基因BIRC5蛋白的表达水平变化。
结果：
1.生物信息学预测结果表明BIRC5可能是miR-3622b-5p潜在的靶基因；荧光素酶报告基因实验结果显示，BIRC5是miR-3622b-5p靶基因。
2.免疫组织化学检测结果显示，BIRC5在4个样本中显著高表达，包括2个弥漫型胃癌组织和2个肠型胃癌组织。
3.Westernblot及免疫荧光显示BIRC5在顺铂耐药胃癌细胞株SGC7901/DDP明显高于亲本胃癌细胞株SGC7901。
3.Westernblot实验显示，瞬时转染miR-3622b-5p模拟物后，顺铂耐药胃癌细胞SGC7901/DDP中的BIRC5蛋白表达水平显著下调;与之相反，瞬时转染miR-3622b-5p抑制剂后，亲本胃癌细胞SGC7901的BIRC5蛋白水平显著上调，证明了miR-3622b-5p可能靶向调控BIRC5蛋白的表达来调节胃癌细胞的耐药。
结论：
与未化疗胃癌病人相比，miR-3622b-5p在获得性耐药胃癌患者血浆中显着下调；与亲本SGC7901细胞相比，miR-3622b-5p在顺铂耐药胃癌细胞系SGC7901/顺铂(DDP)中显着下调。过表达miR-3622b-5p能提高顺铂耐药胃癌细胞系SGC7901/DDP对顺铂的敏感性；与此相反，下调miR-3622b-5p则提高亲本胃癌细胞株SGC7901对顺铂的耐药性。荧光素酶报告基因实验结果表明BIRC5是miR-3622b-5p的靶基因。转染外源性miR-3622b-5p能显著下调胃癌耐药细胞株SGC7901/DDP细胞中BIRC5的表达并提高耐药细胞对顺铂(DDP)的敏感性；相反，转染外源性miR-3622b-5p抑制剂显著上调了BIRC5的蛋白表达并降低亲本胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性。