斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)催乳素(PRL)及其受体(PRLR)的cDNA克隆和PRL基因的表达研究

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通过随机测序和PCR筛库,我们从斜带石斑鱼的垂体cDNA文库中得到了一个全长cDNA.该cDNA全长1342bp,含有636bp的开放读码框,编码212个氨基酸的多肽链.这条多肽链上前24个氨基酸为信号肽,后188个为成熟肽.经过序列分析确认为斜带石斑鱼的PRL.Northern blot在斜带石斑鱼的垂体总RNA中检测到一种约1.4kb的转录形式,表明斜带石斑鱼垂体中可能只存在一种PRL的转录形式.应用一步法RT-PCR结合Southern blot分析,我们研究了PRL在斜带石斑鱼不同组织和早期发育时期的表达情况.结果显示,PRL在斜带石斑鱼的垂体中有大量表达;除此以外,在嗅球、前脑、中脑、下丘脑、后脑、延脑、鳃、脾和脂肪组织也有表达,在肾、肝、血细胞中有微弱表达.同时,我们也检测到PRL在Ⅱ期卵巢中的表达水平低于Ⅲ期卵巢.斜带石斑鱼早期发育时期,从受精卵到受精后6小时PRL基因表达量较低,其中在受精后2h15min未检测到,而从受精后9小时开始,表达量明显升高,并在以后的发育过程中维持这个水平.为了更好地了解PRL在斜带石斑鱼中的生理功能,我们利用PCR方法从斜带1石斑鱼垂体总RNA中得到了PRL受体(PRLR)的cDNA全长序列.该全长cDNA有2114bp,编码区有1458bp,编码486个氨基酸构成的多肽.经SMART分析,该氨基酸序列具有以下特点:前20个氨基酸为信号肽序列;序列内部23亲水个氨基酸为跨膜区;细胞外区由209个氨基酸组成;细胞内区由234个氨基酸组成;细胞外区67、86、108和194位分别有四个潜在的N-糖基化位点;细胞内区有8个可被酪氨酸激酶磷酸化的酪氨酸残基.用DNAstar对斜带石斑鱼和其它9种脊椎动物的PRLR前体蛋白和成熟蛋白的细胞外区、细胞内区和跨膜区进行同源性分析,发现它与金头鲷的同源性最高;对脊椎动物各种形式的PRLR前体进行系统进化分析,发现该受体与金头鲷的亲缘关系最近.其基因表达的组织分布、胚胎发育时期的变化和功能鉴定还有待进一步研究.
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