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作物病原线虫每年对于农业生产造成巨大的经济损失,食线虫真菌作为一种潜在的作物病原线虫的生防菌,具有巨大的应用前景。本文对从少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora Fres.ATCC24927)菌丝表面分离到的嗜根寡养单胞菌(Stenotrophomonas rhizophila WQS37)诱导真菌形成捕食器官的机制进行了初步探索,具体的结果如下: 1.通过荧光原位杂交实验,证实了前期分离得到的嗜根寡养单胞菌存在于野生型少孢节丛孢菌丝的表面;通过透析袋的实验,证明了细菌与菌丝的直接接触是其诱导真菌产生捕食器官的前提。 2.细菌发酵液的正丁醇萃取物对细菌诱导真菌形成捕食器官有明显的促进作用;用SEM和显微技术对添加了正丁醇萃取物的A.oligospora-WQS37共培养体系中的菌丝进行研究,实验结果表明:随着正丁醇萃取物浓度的增加,真菌菌丝的表面细菌的数量增加并形成细菌生物膜,而且真菌形成捕食器官的数量与真菌菌丝表面的细菌量有关。我们从细菌发酵液的正丁醇萃取部位分离出四个化合物,经核磁共振和质谱数据鉴定为二酮哌嗪类化合物(环二肽类化合物): (1) Cyclic dipeptide(L-leucyl-trans-4-hydroxy-L-proline) (2) Cyclic dipeptide(L-Ala-L-Pro) (3) Cyclic dipeptide(L-phenylalanyl-cis-4-hydroxy-L-proline) (4) Cyclic dipeptide(L-phenylalanyl-trans-4-hydroxy-L-proline) 3.将人工合成的Cyclic dipeptide(L-leucyl-trans-4-hydroxy-L-proline)(CLP)添加到A.oligospora-WQS37,真菌会产生捕食器官;对共培养体系中的菌丝进行显微观察,发现细菌在菌丝表面会有极性吸附,同时在真菌菌丝的表面形成细菌生物膜;我们将菌丝表面形成细菌生物膜的真菌菌丝转移到营养贫瘠的培养基上后,其仍旧形成捕食器官。我们以此菌丝为母种在固体平板上进行连续传代实验,结果表明真菌捕食器官伴随着菌丝表面细菌生物膜的消失而最终消失。据文献报道,D-氨基酸可以阻止细菌在固体表面形成生物膜;我们在含有CLP的A.oligospora-WQS37共培养体系中添加了一定浓度的D-氨基酸(D-Met∶ D-Tyr=1∶1),真菌不在产生捕食器官;取出平板内菌丝进行显微观察,我们发现当平板内添加D-氨基酸后,真菌的菌丝表面的细菌的数量减少,细菌形成的生物膜也消失;营养对于细菌的诱导活性也会有影响,伴随着平板内的营养的增加,细菌的诱导活性减弱,菌丝表面细菌形成的生物膜也消失;据文献报道细菌对于真菌的趋化可以影响细菌在真菌表面形成生物膜,通过趋化实验我们发现人工合成的CLP可以增强细菌对真菌代谢产物的趋化性。这些实验结果暗示了二酮哌嗪类化合物可能是通过影响细菌对真菌的趋化而影响细菌在真菌菌丝表面的吸附,从而影响细菌在真菌菌丝表面形成生物膜;而细菌在真菌菌丝表面生物膜的形成可能参与了其诱导真菌产生捕食器官的过程。 4.我们对于细菌及相应的代谢产物的生防效果进行了评估。同土壤中仅仅含有少孢节丛孢的空白组相比,土壤中混合有CLP和A.oligospora-WQS37的杀线虫率大幅度提高;对于其中的菌丝进行显微观察,我们观察到在真菌菌丝的表面仍然有细菌形成的生物膜的存在,真菌捕食器官的数目也明显增多;这些结果说明:细菌及相应的代谢产物具有很好的生防效果,细菌形成生物膜对于真菌产生捕食器官很重要。 论文的创新点: 1.证实了嗜根寡养单胞菌与少孢节丛孢的直接接触是细菌诱导真菌产生捕食器官的前提。 2.研究表明细菌的二酮哌嗪类化合物可能增强了细菌对真菌菌丝的趋化,从而影响在真菌菌丝表面细菌生物膜的形成。 3.研究结果暗示真菌菌丝表面形成的细菌生物膜可能参与了细菌诱导真菌形成捕食器官。