沙丁胺醇(Salbutamol,Sal)是β-肾上腺素受体激动剂类药物,常用于治疗哮喘等疾病。因具有促进骨骼肌生长、减少脂肪蓄积、提高胴体肉/脂比例的作用,在畜禽养殖业存在非法滥用现象。作为一种手性分子,沙丁胺醇的两个对映体作用于生物体时常常表现出较大的差异性,左旋体在生物体内的吸收、发挥作用、代谢等多个方面都优于右旋体。目前关于沙丁胺醇的手性研究主要集中在旋光异构体的制备和药效研究方面,残留检测主要集中在外消旋体层面,在手性异构体的残留检测方面还比较空缺。本文展开以下工作:制备沙丁胺醇多克隆抗体,考察抗体的手性识别特性;同时建立沙丁胺醇旋光异构体间接竞争ELISA检测方法。　　 研究方法:首先通过两条合成路线分别制备出3种沙丁胺醇半抗原(左、消、右旋沙丁胺醇.溴乙酸半抗原H1、H2、H3;左、消、右旋沙丁胺醇-琥珀酸酐半抗原H4、H5、H6),然后采用活泼酯法或混合酸酐法将沙丁胺醇(左、消、右旋)半抗原与载体蛋白偶联,制备免疫原和包被原。通过免疫兔子得到抗血清;采用硫酸铵法纯化兔子抗血清,优化间接竞争酶联免疫吸附(ELISA)检测条件,建立ELISA检测方法。通过抗体和三种沙丁胺醇旋光异构体以及10种结构类似物之间的交叉反应,考察抗体手性识别差异性,初步探讨抗原抗体构效关系;同时对消旋沙丁胺醇的添加样进行了检测评价。　　 研究结果:(1)合成了沙丁胺醇的包被原和免疫原,紫外鉴定偶联成功,成功制备了四种多克隆抗体;(2)其中左旋溴乙酸抗原免疫动物制备出的多抗(PcAb-1),消旋溴乙酸抗原免疫动物制备出的多抗(PcAb-2)建立了间接竞争ELISA方法,IC50分别为2.01、46.67 ng/mL,检测限(IC10)分别为0.12、5.27 ng/mL,线性范围分别为0.34～13.91 ng/mL、10.90～263.02 ng/mL。PcAb-1建立的ELISA方法,右旋沙丁胺醇(S-(+)-Sal)和消旋沙丁胺醇(R,S-(±)-Sal)的交叉反应率分别为0.4％和31.6%;PcAb-2建立的ELISA方法,S-(+)-Sal和左旋沙丁胺醇(R-(-)-Sal)的交叉率分别为30.1%和130.9%。(3)由左旋琥珀酸酐抗原免疫兔子获得的多抗(PcAb-4)、消旋琥珀酸酐抗原免疫兔子获得多抗(PcAb-5)均建立了间接竞争ELISA方法,IC50分别为1.46、45.74 ng/mL,检测限(IC10)分别为0.06、5.20 ng/mL,线性范围分别为0.22～12.58、11.44～240.55 ng/mL。PcAb-4建立的ELISA方法,S-(+)-Sal和R,S-(±)-Sal的交叉反应率分别为0.4%和34.2%;PcAb-5建立的ELISA方法,R-(-)-Sal和S-(+)-Sal的交叉率分别为188.0%和190.1%。(4)选择了克伦特罗、马布特罗等10种药物分别做左旋体和消旋体四种多抗的交叉反应,四种多抗都对克伦特罗、马布特罗等含有仲胺基的药物呈现交叉反应性,初步推断抗体识别位点为仲胺基附近的手性中心位置。(5)利用PcAb-4建立的间接竞争ELISA方法,进行实际样品添加回收实验。猪肉的添加回收率在93.9%～109.2%之间,猪肝的回收率在86.7%～101.3%之间。　　 研究结论:(1)分别从溴乙酸路线和琥珀酸酐路线制备左旋、消旋、右旋沙丁胺醇药物的对应抗体,成功制备出两种左旋药物对应抗体(PcAb-1和PcAb-4)和两种消旋药物对应抗体(PcAb-2和PcAb-5),两条路线的右旋抗原免疫动物后产生的抗血清都只能识别沙丁胺醇包被抗原,不能识别三种沙丁胺醇药物。　　 (2)本研究中溴乙酸路线和琥珀酸酐路线半抗原的连接位点不同,获得的两种抗左旋药物抗体PcAb-1和PcAb-4性能相近。两种抗体的IC50、灵敏度和检测限都相近。两种抗消旋药物抗体PcAb-2和PcAb-5的性能也相近,表现在IC50、灵敏度和检测限数值接近。　　 (3)PcAb-1和PcAb-4具有良好的手性识别性能,对左旋沙丁胺醇识别能力远高于对右旋沙丁胺醇药物的识别能力;此外,与结构类似物的交叉反应数据显示,这两种抗体(PcAb-1和PcAb-4)在对药物识别时具有手性选择性。　　 (3)PcAb-2和PcAb-5在手性识别方面存在差异,其中一个消旋抗体对左旋药物和右旋药物存在识别差异性,另一个消旋抗体对对映体的识别能力相当。