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目的
高血压脑出血是常见的脑卒中类型，在西方国家出血性卒中占10%-15%，而在中国人群中其比例高达20%-54%，是仅次于缺血性卒中的第二大类型，但与缺血性卒中相比，其致死致残率更高。它是由于高血压病患者因脑内血管的变性、坏死、破裂而引起的一种脑内出血性疾病。流行病学研究表明，绝经后妇女的心脑血管疾病和高血压发病率明显高于同年龄的绝经前妇女。进一步的研究发现，雌激素对心血管疾病具有保护作用，同时还与血压的调节相关。其作用机制可能是通过下调了肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system，RAS)来实现的。血管重塑是高血压形成的过程中的显著性病理特征，同时也是脑出血的主要原因之一。在高血压血管重塑时中发生了内膜血管内皮细胞的损伤，中层平滑肌细胞的增殖和表型转化，以及细胞外基质的沉积等。在血管重塑过程中血管平滑肌(vascular smooth muscle cells VSMCs)增殖及表型转化在起着重要的作用。相关研究表明雌激素可以通过抑制VSMCs的增殖、迁移、减少炎症因子表达而对心脑血管产生保护作用。本研究通过探讨雌激素对人脑VSMCs的影响，阐明雌激素抑制VSMCs表型转化及增殖的分子作用机制，为高血压脑出血临床治疗提供重要的参考依据。
方法
1.观察人脑VSMCs在不同浓度(10-9mmol/L ， 10-8mmol/L ， 10-7mmol/L)雌二醇及不同浓度(10-8mmol/L，10-7mmol/L，10-6mmol/L)他莫昔芬(雌激素受体阻断剂)刺激人脑VSMCs24小时后生长形态的变化。CCK-8法测定不同雌二醇及他莫昔芬对人脑VSMCs增殖的抑制情况。流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。qRT-PCR及Westernblot检测雌激素相关受体基因ESR(ESR1、ESR2、GPER)，心肌素(MYOCD)和血清反应因子(SRF)以及凋亡基因Caspase-3mRNA及其蛋白的表达变化。
2.观察人脑VSMCs在10-7mmol/LAngII处理72小时后加入不同浓度(10-9mmol/L，10-8mmol/L，10-7mmol/L)雌二醇细胞胞体形态的变化。CCK-8法测定各组细胞增殖的抑制情况。流式细胞仪检测各组的细胞周期分布情况。qRT-PCR及Westernblot测定血管平滑肌标志物α-SMA、SM22α、FLNmRNA及其蛋白的表达情况。Elisa测定各组细胞培养上清液IL-6、IL-8的含量。Westernblot测定各组炎性因子MCP-1、TLR4的表达。免疫荧光染色观察雌激素对AngII诱导人脑血管平滑肌表型转化标志物α-SMA、SM22α及FLN的表达水平的影响。
3.通过构建肾性大鼠高血压及去卵巢型进一步明确雌激素对大鼠血压及脑出血的影响。36只SD大鼠随机分为六组：正常雌激素组、假手术组、低雌激素组、高雌激素组、雌激素受体激动组、雌激素受体拮抗组，每组6只。建模后分别在2、6周每组各取3只，H&E染色观察脑出血好发区域小血管发现变化。6周时免疫荧光检测造模前后不同处理组脑血管ERα、α-SMA和Desmin的表达情况。
结果
雌二醇通过上调ESR1、ESR2、GPER、MYOCD、SRF的表达，下调Caspase-3的表达，从而抑制VSMCs的增殖及凋亡，而他莫昔芬的作用相反。血管紧张素II通过降低α-SMA、SM22α的表达，促进FLN、MCP-1、TLR4、IL-6、IL-8蛋白表达，从而诱导VSMCs的增殖、促进血管平滑肌由收缩型向合成型转化，同时促进局部炎性反应。雌激素可以通过促进α-SMA、SM22α的表达，降低FLN、MCP-1、TLR4、IL-6、IL-8蛋白表达，从而抑制血管紧张素II诱导的VSMCs的增殖、抑制VSMCs由收缩型向合成型转化及局部炎性反应的发生。通过大鼠实验发现雌激素可以抑制肾性高血压大鼠血压的升高，减少高血压诱导的脑出血，他莫昔芬具有相反的作用。同时还发现雌二醇可促进大鼠脑血管中ERα，α-SMA和Desmin的表达减弱；他莫昔芬具有相反的作用。
结论
雌激素可抑制人脑VSMCs的增殖及凋亡，同时还能抑制血管平滑肌由收缩型向合成型转化，防止血管损伤，调节周围炎症反应。从而对脑血管产生保护作用，减少脑出血的发生。
高血压脑出血是常见的脑卒中类型，在西方国家出血性卒中占10%-15%，而在中国人群中其比例高达20%-54%，是仅次于缺血性卒中的第二大类型，但与缺血性卒中相比，其致死致残率更高。它是由于高血压病患者因脑内血管的变性、坏死、破裂而引起的一种脑内出血性疾病。流行病学研究表明，绝经后妇女的心脑血管疾病和高血压发病率明显高于同年龄的绝经前妇女。进一步的研究发现，雌激素对心血管疾病具有保护作用，同时还与血压的调节相关。其作用机制可能是通过下调了肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system，RAS)来实现的。血管重塑是高血压形成的过程中的显著性病理特征，同时也是脑出血的主要原因之一。在高血压血管重塑时中发生了内膜血管内皮细胞的损伤，中层平滑肌细胞的增殖和表型转化，以及细胞外基质的沉积等。在血管重塑过程中血管平滑肌(vascular smooth muscle cells VSMCs)增殖及表型转化在起着重要的作用。相关研究表明雌激素可以通过抑制VSMCs的增殖、迁移、减少炎症因子表达而对心脑血管产生保护作用。本研究通过探讨雌激素对人脑VSMCs的影响，阐明雌激素抑制VSMCs表型转化及增殖的分子作用机制，为高血压脑出血临床治疗提供重要的参考依据。
方法
1.观察人脑VSMCs在不同浓度(10-9mmol/L ， 10-8mmol/L ， 10-7mmol/L)雌二醇及不同浓度(10-8mmol/L，10-7mmol/L，10-6mmol/L)他莫昔芬(雌激素受体阻断剂)刺激人脑VSMCs24小时后生长形态的变化。CCK-8法测定不同雌二醇及他莫昔芬对人脑VSMCs增殖的抑制情况。流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。qRT-PCR及Westernblot检测雌激素相关受体基因ESR(ESR1、ESR2、GPER)，心肌素(MYOCD)和血清反应因子(SRF)以及凋亡基因Caspase-3mRNA及其蛋白的表达变化。
2.观察人脑VSMCs在10-7mmol/LAngII处理72小时后加入不同浓度(10-9mmol/L，10-8mmol/L，10-7mmol/L)雌二醇细胞胞体形态的变化。CCK-8法测定各组细胞增殖的抑制情况。流式细胞仪检测各组的细胞周期分布情况。qRT-PCR及Westernblot测定血管平滑肌标志物α-SMA、SM22α、FLNmRNA及其蛋白的表达情况。Elisa测定各组细胞培养上清液IL-6、IL-8的含量。Westernblot测定各组炎性因子MCP-1、TLR4的表达。免疫荧光染色观察雌激素对AngII诱导人脑血管平滑肌表型转化标志物α-SMA、SM22α及FLN的表达水平的影响。
3.通过构建肾性大鼠高血压及去卵巢型进一步明确雌激素对大鼠血压及脑出血的影响。36只SD大鼠随机分为六组：正常雌激素组、假手术组、低雌激素组、高雌激素组、雌激素受体激动组、雌激素受体拮抗组，每组6只。建模后分别在2、6周每组各取3只，H&E染色观察脑出血好发区域小血管发现变化。6周时免疫荧光检测造模前后不同处理组脑血管ERα、α-SMA和Desmin的表达情况。
结果
雌二醇通过上调ESR1、ESR2、GPER、MYOCD、SRF的表达，下调Caspase-3的表达，从而抑制VSMCs的增殖及凋亡，而他莫昔芬的作用相反。血管紧张素II通过降低α-SMA、SM22α的表达，促进FLN、MCP-1、TLR4、IL-6、IL-8蛋白表达，从而诱导VSMCs的增殖、促进血管平滑肌由收缩型向合成型转化，同时促进局部炎性反应。雌激素可以通过促进α-SMA、SM22α的表达，降低FLN、MCP-1、TLR4、IL-6、IL-8蛋白表达，从而抑制血管紧张素II诱导的VSMCs的增殖、抑制VSMCs由收缩型向合成型转化及局部炎性反应的发生。通过大鼠实验发现雌激素可以抑制肾性高血压大鼠血压的升高，减少高血压诱导的脑出血，他莫昔芬具有相反的作用。同时还发现雌二醇可促进大鼠脑血管中ERα，α-SMA和Desmin的表达减弱；他莫昔芬具有相反的作用。
结论
雌激素可抑制人脑VSMCs的增殖及凋亡，同时还能抑制血管平滑肌由收缩型向合成型转化，防止血管损伤，调节周围炎症反应。从而对脑血管产生保护作用，减少脑出血的发生。