【摘 要】
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该文运用免疫胶体金电镜观察、免疫荧光观察、以及尝试使用针对植物组织的不完全酶解-免疫胶体金-DGD包埋去包埋法,对百合花粉母细胞减数分裂前期Ⅰ的肌动蛋白进行定位,证实
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该文运用免疫胶体金电镜观察、免疫荧光观察、以及尝试使用针对植物组织的不完全酶解-免疫胶体金-DGD包埋去包埋法,对百合花粉母细胞减数分裂前期Ⅰ的肌动蛋白进行定位,证实在胞质通道、细胞质、细胞核中都有肌动蛋白分布,并常在胞质通道处成线性排列;利用银增强光镜技术和F-actin特异荧光探针观察到F-actin在这一时期呈精细的网络状,并在核周围形成篮状结构,紧密包裹着细胞核;穿壁的染色质小球也被网络包围着;随着减数分裂过程的推进,F-actin呈现明显的排列变化,逐渐集聚为更粗的束.利用DAPI荧光染料和TRITC-phalloidin标记,显示凝线期染色质穿壁运动与肌动蛋白的分布有密切关系.根据观察结果,认为细胞骨架可处于稳定态、亚稳定态和不稳定态三种状态.在染色质穿壁过程中,染色质与周围的细胞骨架的联系处于剧烈的动态变化之中.光镜下看到的空白区,反映了在该区域细胞骨架处于亚稳定态、并正在建立新的骨架联系的事实.通过改进的DDRT-PCR技术表明,凝线期的百合花粉母细胞有着基因的差异表达,这提示细胞融合的发生可能与基因的差别表达有关.利用olig(dT)为引物反转录合成cDNA,并以此为模板,以锚锭引物T8和随机引物P10组合进行PCR扩增,试用变性PAGE梯度凝胶结合银染法进行差异显示,分离到Sa和Sb两个差异表达的基因片段.将它们成功克隆进pT-Adv载体,并已转化入大肠杆菌TOP10F中,以备在后续实验中研究分析.
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