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目的:观察乳酸杆菌对宫颈癌细胞株Hela细胞的抑制作用,进一步探讨乳酸杆菌对宫颈癌细胞杀伤作用的机制。从而为开发出安全、有效、低成本的预防和治疗宫颈癌的药物打下基础。方法:1.胎盘兰染色在油镜下观察并计数不同状态的乳酸杆菌与宫颈癌细胞株Hela细胞共培养后在不同时间阶段的粘附指数及粘附后细胞活力的变化。2.用流式细胞仪(抗体直接免疫荧光技术)检测乳酸杆菌对宫颈癌细胞表面表型(CD80、CD86、MHC-1)的影响。3.用MTT法观察乳酸杆菌调节免疫细胞(NK细胞、CTL细胞)对宫颈癌细胞杀伤作用的影响。结果:1.乳酸杆菌与宫颈癌Hela细胞株作用后粘附指数及细胞活力的1.1油镜下观察乳酸杆菌对Hela细胞的黏附抑制作用:肿瘤细胞培养12小时后,培养液均清亮,对照组细胞生长密集,生长状态良好,光泽度好;细胞伸展,呈不规则梭形。各乳酸杆菌组细胞密度较对照组低,光泽度下降。灭活组乳酸杆菌对Hela细胞的黏附密集度明显高于活菌组,细胞活力较好。48小时后见对照组细胞,已有重叠生长,乳酸杆菌组细胞,出现细胞减少,稀疏,细胞形态破坏,细胞变形,细胞皱缩,体积变小,细胞间隙增大,变圆。胞膜破裂,肿胀等。灭活组较活菌组更加显著,并且随着时间延长变化更加明显。1.2两组乳酸杆菌黏附指数比较,活菌组乳酸杆菌黏附指数随着培养时间延长逐渐增加,在培养12小时达高峰,随后随着时间延长,黏附指数逐渐降低,灭活组与活菌组相似,在每一个培养时间比较,灭活组乳酸杆菌粘附指数均高于活菌组。1.3乳酸杆菌黏附后Hela细胞活力比较:在共培养1 h、3 h、6 h阶段两组Hela细胞活力无差异,但在培养12h时,活菌组细胞活力突然下降,而灭活组细胞活力仍保持在高水平,再随着时间的延长,灭活组共培养24h宫颈癌细胞活力开始下降,并低于活菌组(P<0.01)。2.乳酸杆菌对宫颈癌细胞表面抗原(MHC-1类分子、CD80和CD86分子)表达的影响测定(流式细胞技术):2.1不同状态的乳酸杆菌对宫颈癌细胞表面抗原表达的影响:经乳酸杆菌作用后两种状态的乳酸杆菌组的宫颈癌细胞表面抗原表达率均明显高于对照组,灭活菌组与活菌组对促进宫颈癌细胞表面抗原表达作用具有显著差异性,与灭活的乳酸杆菌作用后宫颈癌Hela细胞表面抗原表达率明显高于活菌组。2.2对照组与乳酸杆菌宫颈癌细胞表面抗原表达的影响:对照组宫颈癌细胞表面抗原(MHC-1、CD80、CD86)表达率极低。经乳酸杆菌作用后两种状态的乳酸杆菌组的宫颈癌细胞表面抗原表达率均明显高于对照组(P<0.05)。3.MTT法测定乳酸杆菌调节免疫细胞对宫颈癌细胞杀伤作用的结果: 3.1不同浓度乳酸杆菌作用后NK细胞、CTL细胞对Hela细胞的杀伤活性实验结果表明:乳酸杆菌作用后明显增强NK细胞、CTL细胞对宫颈癌Hela细胞的杀伤活性,并且NK细胞、CTL细胞与不同浓度乳酸杆菌作用后杀伤活性存在显著差异性(P〈0.05),以效靶比是20:1时杀伤活性最强,具有浓度依赖性。3.2不同时间阶段乳酸杆菌作用后NK细胞、CTL细胞对Hela细胞的杀伤活性结果表明:NK细胞、CTL细胞与乳酸杆菌作用不同时间后其杀伤活性存在显著差异性,并且随着时间延长(12、24、48、72)其杀伤活性随之增强,有时间依赖性。结论:1.乳酸杆菌能很好的黏附并抑制宫颈癌Hela细胞的生长,灭活的乳酸杆菌对宫颈癌细胞有着更好的黏附抑制作用,并且具有时间依赖性。2.乳酸杆菌能上调宫颈癌细胞表面抗原CD80、CD86、MHC-1的表达,灭活的乳酸杆菌作用后宫颈癌Hela细胞表面抗原表达率明显高于活菌组。3.用MTT法实验结果表明乳酸杆菌能促进免疫细胞(NK细胞、CTL细胞)对宫颈癌细胞的杀伤作用,并且呈剂量-时间依赖性。