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目的:内源性硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)可参与多种系统的生理及病理过程,并且在部分肿瘤发生发展过程中有重要的作用。乳腺癌作为女性的高发性肿瘤,有关硫化氢报道甚少。因此,本文来探索内源性硫化氢在乳腺癌发生发展过程中的生物学作用及其分子机制。 方法:Western blot检测人正常乳腺细胞MCF-10A与两株乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE)的表达;通过亚甲基蓝法测定CSE siRNA和CSE抑制剂炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PAG)对MCF-7内源性硫化氢产生的影响;MTT比色法检测CSE siRNA和PAG对MCF-7细胞生长的影响;EdU检测法检测CSE siRNA和PAG对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞术检测CSE siRNA和PAG对MCF-7细胞周期及凋亡的影响;划痕实验检测PAG对MCF-7细胞迁移能力的影响;RT-PCR和Western blot检测STAT3 siRNA对MCF-7细胞CSE基因表达的影响;亚甲基蓝法检测STAT3 siRNA对MCF-7细胞内源性硫化氢产生的影响;荧光素酶报告基因检测STAT3对CSE启动子的激活作用。 结果: 1、Western blot结果显示,与正常人乳腺细胞MCF-10A相比,MCF-7细胞中CSE蛋白呈过表达。 2、亚甲基蓝法检测显示,CSE siRNA和PAG均抑制MCF-7细胞内源性硫化氢的生成。 3、MTT比色法检测显示,CSE siRNA和PAG均抑制MCF-7细胞的生长。 4、EdU检测显示,CSE siRNA和PAG均抑制MCF-7细胞的增殖。 5、流式细胞术检测显示,CSE siRNA和PAG将MCF-7细胞的周期阻滞在S期。 6、划痕实验显示,PAG可抑制MCF-7细胞迁移的速率,且呈现时间和剂量依赖性。 7、流式细胞术检测显示,CSE siRNA和PAG对MCF-7细胞凋亡无明显影响。 8、RT-PCR与Western blot结果表明,STAT3 siRNA可下调MCF-7细胞中CSE mRNA及蛋白水平。 9、亚甲基蓝法检测显示,STAT3 siRNA抑制MCF-7细胞内源性硫化氢生成。 10、荧光素酶报告基因检测显示,STAT3可激活CSE的启动子。 结论: 1、抑制CSE/H2S体系可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的生长及增殖,且将周期阻滞在S期。 2、抑制CSE/H2S体系可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的迁移。 3、抑制CSE/H2S体系对人乳腺MCF-7细胞凋亡无明显影响。 4、STAT3可能通过激活CSE启动子来调控CSE基因的表达,从而影响内源性硫化氢的生成。