苹果干旱/高盐转录组测序分析与MdMYB59功能鉴定

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苹果在我国农业产业中占有重要地位,研究抗逆新品种可以提高其产量及品质,减少非生物胁迫造成的损失。目前,在苹果方面,与盐胁迫相关的MYB基因功能研究还较少,与苹果MYB基因参与盐胁迫反应的代谢调控机理的研究尚未见报道。本研究以苹果‘金冠’为试材,通过不同时间节点的干旱、高盐处理后进行转录测序的分析研究;同时,通过Q-PCR技术筛选到可受高盐胁迫诱导表达的基因Md MYB59,并对其基因功能进行了鉴定。主要获得的研究结果如下:1、通过Q-PCR技术检测了10个MYB基因在低温、干旱及盐胁迫中的响应情况,结果表明,MYB59基因可受高盐胁迫诱导上调表达明显。2、根据苹果Md MYB59基因的登陆号MDP0000187872,在苹果‘金冠’基因数据库中获取到基因序列全长,进行PCR扩增,结果显示,Md MYB59基因编码区全长885bp,可编码294个氨基酸,等电位点为7.66;用NCBI软件分析结果表明,Md MYB59序列具有作为MYB转录因子相对保守的功能结构域;系统进化树构建的结果显示,Md MYB59与拟南芥S22亚族的成员(At MYB4、At MYB70、At MYB73、At MYB77)以及与苹果(Md MYB5、Md MYB36、Md MYB90、Md MYB184、Md MYB185)亲缘关系最近。3、苹果Md MYB59与拟南芥S22亚家族中MYB成员的氨基酸序列对比结果表明,Md MYB59基因具有R2和R3序列的保守结构域,属于典型的Md R2R3类型MYB转录因子;Md MYB59瞬时转化了洋葱表皮细胞的亚细胞定位结果表明,Md MYB59蛋白具有核定位特性,定位于细胞核中;为进一步研究该基因启动子元件的功能,对该基因编码区上游的1500bp序列进行了克隆,并利用Plant Care软件对其功能元件进行了预测分析,表明Md MYB59基因的上游启动子中存在与植物激素和逆境信号因子相关的功能元件。4、利用Q-PCR技术检测Md MYB59基因在不同时间节点的干旱、低温及盐胁迫处理后的表达情况,结果显示,Md MYB59基因能被干旱、高盐胁迫诱导而上调表达,表明该基因在高盐胁迫反应中可能起到正调控作用。5、为进一步研究Md MYB59基因的功能,将Md MYB59基因过表达的转基因苹果愈伤与对照相比,在盐胁迫处理下鲜重增加、相对电导率降低,结果表明,Md MYB59基因过表达增强了愈伤组织的抗盐性;将Md MYB59基因转化烟草并获取稳定的转基因植株,进行盐胁迫诱导试验,结果表明,烟草中Md MYB59过表达能增强转基因植株的抗盐性。6、为研究苹果幼苗对盐和干旱胁迫反应进行转录组测序,结果表明,共鉴定出18707个差异表达基因,检测到12144和7506个差异表达基因分别与盐胁迫和干旱胁迫相关。
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