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目的:多孔钛合金支架材料和表面微弧氧化修饰的多孔钛合金支架材料与成骨细胞联合培养,对比研究在不同强度超声作用下,细胞黏附、增殖和成骨分化特性,筛选适宜体外低强度脉冲超声波(Low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)强度。为LIPUS联合多孔钛合金人工骨材料修复大面积骨缺损治疗方法提供基础数据。 研究方法:1、分组:将多孔钛合金支架材料(简称多孔T)和多孔钛合金表面微弧氧化修饰的支架材料(简称多孔MT)两种支架材料按超声强度不同随机各分为5组(0T、10T、30T、60 T和100 T)、(0 MT、10 MT、30 MT、60 MT和100MT),保证每组样品数量不低于3。5组分别加载超声强度为0、10、30、60、100mW/cm2。强度0组接受不开功率源的1次/d的假辐照,其他各组接受1次/d的超声辐照。2、在支架材料表面上进行小鼠前成骨细胞(Mouse embryo osteoblastprecursor cells,MC3T3-E1)的接种和培养。3、采用扫描电镜(Scaning ElectronMicroscope,SEM)评价不同强度LIPUS作用下两种支架材料上MC3T3-E1黏附状态。4、采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法和碘化丙啶(Propidiumlodide,PI)染色法分析LIPUS对两种支架材料上MC3T3-E1增殖的影响。5、采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatese,ALP)和Ⅰ型胶原(mouse Collagen typeⅠ,COLⅠ)含量测定技术分析LIPUS对两种支架材料上MC3T3-E1分化的影响。 结果:1、SEM观察结果:MC3T3-E1细胞在两种支架材料表面上均伸展良好,呈圆梭形、多角形等多种形态,表面凹凸不平,伸出伪足,并可见细胞长入材料孔径内部,但两种材料之间以及同种材料上不同强度组之间的细胞密度及形态无明显区别。2、MTT检测结果显示:在第1,3,7d两种材料上各超声强度组的MC3T3-E1细胞数量均随着培养时间的延长而增加,在两种材料的三个时间点中强度为100mW/cm2的MTT值均低于其他组(P<0.05),具有统计学差异。而其他组之间没有统计学差异。3、PI染色法结果显示:在两种材料上超声加载5d时各超声强度组的MC3T3-E1在强度100mW/cm2组的细胞增殖指数值均低于其他组(P<0.05),具有统计学差异。而其他组之间没有统计学差异。4、ALP检测结果显示:在第1,3,7d两种材料上各超声强度组的MC3T3-E1细胞的ALP值均随着培养时间的延长先增高再降低,在1,3,7d两种材料强度为30mW/cm2的ALP值明显高于其他组,除1d多孔MT材料组以外,均具有统计学差异(P<0.05)。在3、7d两种材料强度为100mW/cm2的ALP值低于其他组,在7d多孔T材料与3d多孔MT材料组具有统计学差异(P<0.05)。5、ColⅠ检测结果显示:在第7,10,14d两种材料上各超声强度组的MC3T3-E1细胞的Ⅰ型胶原的值随着时间的延长先增高后降低。在7,10,14三个时间点两种材料上30mW/cm2组的Ⅰ型胶原的值明显高于其他组,具有统计学差异(P<0.05)。在10d多孔MT材料组强度为100mW/cm2组的Ⅰ型胶原的值低于其他组,具有统计学意义(P<0.05),其他组间没有统计学意义。 结论:不同强度(0、10、30、60、100mW/cm2)的LIPUS体外作用于直径10mm高度2mm的多孔T和多孔MT两种材料时,在分化方面,30mW/cm2的LIPUS均优于其他强度组,促细胞黏附和增殖方面,各强度组间无差异。30mW/cm2在本实验条件下为最优强度。