【摘 要】
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目的:足细胞损伤是糖尿病肾脏病（DKD）的重要病理改变,非编码RNA在调控DKD足细胞损伤中发挥重要作用。课题组前期研究表明,micro RNA-26a-5p（miR-26a-5p）在DKD足细胞中表达减少,并通过抑制其靶基因瞬时电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）的表达减轻DKD足细胞损伤,而长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5（lnc RNA SNHG5）与miR-26a-5p具有互补的结合位
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目的:足细胞损伤是糖尿病肾脏病（DKD）的重要病理改变,非编码RNA在调控DKD足细胞损伤中发挥重要作用。课题组前期研究表明,micro RNA-26a-5p（miR-26a-5p）在DKD足细胞中表达减少,并通过抑制其靶基因瞬时电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）的表达减轻DKD足细胞损伤,而长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因5（lnc RNA SNHG5）与miR-26a-5p具有互补的结合位点。然而,关于SNHG5在DKD足细胞损伤中的表达水平和作用尚不清楚。本研究拟通过体内外实验,明确SNHG5在DKD足细胞中的表达水平及其与足细胞损伤的关系,并初步探讨SNHG5参与DKD足细胞损伤的可能机制,为DKD的早期诊断和靶向治疗提供新的理论基础。方法:本研究分为动物体内实验和细胞体外实验两部分。（1）体内实验:10周龄db/db小鼠和db/m小鼠各6只,采集小鼠血、尿、肾组织标本,检测肾脏肥大指数（KW/BW）、空腹血糖（FBG）和随机尿白蛋白肌酐比（ACR）、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）等指标。通过光镜和透射电镜观察肾小球的病理改变;通过实时荧光定量PCR测定肾组织SNHG5、miR-26a-5p的表达水平,通过荧光原位杂交观察SNHG5、miR-26a-5p的细胞定位,进行Western blot和免疫组化测定足细胞结构蛋白Nephrin、Podocin表达水平和分布。（2）体外实验:小鼠足细胞（MPC5）分为正常糖组、高渗组、高糖组、高糖+si-NC组和高糖+si-SNHG5组共5组,测定各组足细胞SNHG5、miR-26a-5p表达水平和Nephrin、Podocin蛋白的表达水平,采用生物信息学检索和荧光素酶实验验证SNHG5和miR-26a-5p的靶向结合关系。结果:（1）体内实验:与db/m小鼠相比,db/db小鼠肾组织在光镜下见肾小球体积增大,细胞外基质增多,在电镜下见基底膜增厚,足突融合率增加（P＜0.01）;ACR、FBG和血脂水平升高（均P＜0.01）,KW/BW降低（P＜0.05）,Scr、BUN差异无统计学意义;db/db小鼠肾组织SNHG5表达增多,主要表达于细胞质中,而miR-26a-5p、Nephrin和Podocin表达减少（均P＜0.05）;db/db小鼠肾组织SNHG5表达水平与miR-26a-5p表达水平成负相关,与小鼠ACR成正相关（P＜0.05）。（2）体外实验:与正常糖组比较,高糖组足细胞SNHG5表达增多,而miR-26a-5p、Nephrin和Podocin表达减少（P＜0.05）;与高糖+si-NC组比较,高糖干预的足细胞转染si-SNHG5后,足细胞中SNHG5表达减少,而miR-26a-5p、Nephrin和Podocin表达增加（P＜0.05）;DIANA Lnc Base和Star Base在线数据库提示miR-26a-5p存在与SNHG5互补的位点,荧光素酶实验提示SNHG5靶向调节miR-26a-5p表达。结论:（1）SNHG5在db/db小鼠肾组织中表达增加,且与ACR水平正相关;（2）SNHG5在高糖损伤的足细胞中表达增多,敲减SNHG5可以减轻高糖造成的足细胞损伤;（3）SNHG5可能通过靶向结合miR-26a-5p促进DKD足细胞损伤。
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