背景前列腺癌是世界老年男性常见的恶性肿瘤之一,发病率居男性恶性肿瘤的第二位,每年全世界有超过38万的男性死于前列腺癌。恩杂鲁胺（enzalutamide）作为第二代雄激素受体拮抗剂,是FDA批准的第一个既用于转移性又用于非转移性去势抵抗前列腺癌的口服药物,广泛应用于各个时期的前列腺癌,普遍延长了患者的总体生存期。但是随着恩杂鲁胺治疗的深入,药物耐药现象也随之出现,其机制主要与雄激素受体突变以及旁路异常激活相关。目的通过体外实验评价酪氨酸激酶抑制剂阿法替尼对前列腺癌细胞增殖的影响,并对其机制进行初步探讨。方法1.利用cBioportal、UALCAN、GEPIA三个在线数据库分析酪氨酸激酶基因表达以及突变情况与前列腺癌临床的相关性。2.MTT增殖实验检测多种酪氨酸激酶抑制剂（吉非替尼,埃罗替尼,索拉非尼,达克替尼和阿法替尼）联合恩杂鲁胺对前列腺癌细胞（DU145,PC3,22RV1,C4-2,LNcaP）增殖的作用3.流式细胞术检测阿法替尼联合恩杂鲁胺对前列腺癌细胞细胞周期及凋亡的作用4.Transwell实验阿法替尼联合恩杂鲁胺对前列腺癌细胞侵袭潜能的作用5.Western blot法检测阿法替尼联合恩杂鲁胺对前列腺癌细胞酪氨酸激酶,雄激素受体,细胞凋亡和周期以及EMT过程相关蛋白表达的作用。结果:1.在多种酪氨酸激酶抑制剂中,阿法替尼具有较好的抗肿瘤活性,IC50值达到nM级别。2.阿法替尼联合恩杂鲁胺能协同抑制前列腺癌细胞增殖及侵袭潜能并且能诱导细胞凋亡,同时能够阻滞前列腺癌细胞周期于G2/M期。3.Western blot实验进一步证实恩杂鲁胺处理后细胞AR和PSA表达水平降低的同时增加了 HER2的表达,和促进Akt磷酸化,而加入阿法替尼后可以有效抑制HER2,HER3的表达同时抑制EGFR以及Akt的磷酸化。PCR实验也表明,阿法替尼和恩杂鲁胺联用可以对酪氨酸激酶EGFR,ERK,BRAF,HER2,HER3以及雄激素轴基因AR,PSA,NKX3-1的mRNA水平产生明显的协同抑制效应。另一方面,药物联用对抗凋亡蛋白BCL-2存在显著抑制效应,对促凋亡蛋白Bax的表达存在显著促进效应,同时可以对细胞周期蛋白P53有一定的抑制作用,对P21也呈现一定的促进作用,证明药物联用可以调控细胞周期。并且可以一定程度地阻碍前列腺癌细胞的迁移侵袭过程,具体表现为E-cadherin蛋白表达明显增加,N-cadherin蛋白表达明显减少。结论:1.本研究在酪氨酸激酶抑制剂中筛选出了对前列腺癌肿瘤细胞增殖具有显著抑制作用的药物阿法替尼。而且阿法替尼与恩杂鲁胺的联合应用对前列腺癌细胞的增殖和侵袭潜能具有显著的协同抑制效应,对前列腺癌细胞的凋亡具有协同促进效应,同时可以阻滞前列腺癌细胞周期,具有进一步研究的价值。2.机制研究表明阿法替尼与恩杂鲁胺的联合应用对酪氨酸激酶HER2、ErBb3,EGFR磷酸化及雄激素受体AR、PSA转录和翻译水平的具有显著协同抑制效应,同时能有效逆转恩杂鲁胺导致的HER2表达增加和Akt的磷酸化,在体内外具有良好的抗肿瘤活性。