本文以Lb.plantarum QS670发酵牛乳为原料,依次采用超滤法、葡聚糖凝胶层析法、反向高效液相色谱法（RP-HPLC）分离纯化ACE抑制肽。通过纳升级液相色谱串联二级质谱法（NanoLC-MS/MS）鉴定该ACE抑制肽氨基酸序列,利用Uni Prot、AHTPDB数据库验证其来源和创新性后,采用固相合成法人工合成ACE抑制肽,并进一步探究其理化特性。结果如下:1.Lb.plantarum QS670发酵牛乳上清液经过超滤得到3个组分（kDa<3、3>kDa<10、k Da>10）,其中k Da<3的组分具有最大ACE抑制活性,IC₅₀为1.998mg/mL;将其冻干复溶后,采用Sephadex G-15分离纯化,经过条件优化,得到最佳层析条件:上样量1.5 m L、上样浓度200 mg/mL、洗脱流速0.8 mL/min,在最佳层析条件下洗脱,得到4个组分,其中组分D具有最高ACE抑制活性,IC₅₀为1.628mg/mL;组分D冻干复溶后通过RP-HPLC分离纯化,得到4个组分,其中组分D₁具有最大ACE抑制活性,IC₅₀为1.258 mg/mL。2.组分D₁经过NanoLC-MS/MS分析,鉴定出1条二肽序列Gly-Ala（GA）;将GA的序列与UniProt数据库中牛乳主要蛋白序列进行比对,得到4处可能的来源与对应的位置,分别为:αs1-CN（f177-178）、κ-CN（f20-21）、β-LG（f13-14）、SA（f198-199）;通过AHTPDB数据库查证,GA首次从发酵牛乳中获得。3.采用固相合成法人工合成GA,并对成品进行质谱和纯度分析,验证成品序列为GA,纯度为99.89%;合成肽GA的ACE抑制活性IC₅₀为1.217 mg/mL,与组分D₁相比无显著性差异。4.经测定,合成肽GA在pH2¹2范围内具有较高且稳定的溶解性和ACE抑制活性,其溶解性均高于88.2%,pH值为8时ACE抑制活性最高,为66.8%;合成肽GA的ACE抑制活性在20⁶0℃范围内均高于63.5%,表现出了较好的稳定性,超过60℃后,随着温度升高显著降低,在100℃时降至最低48.7%;合成肽GA依次经过胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶处理后,虽然活性显著降低,但仍保持在49.2%以上,具有一定的抗消化酶稳定性,证明合成肽GA为底物型ACE抑制肽;合成肽GA分别经过0⁸ mmol/L浓度的金属离子Na⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、K⁺处理后,均无显著性变化。