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目的:通过制备对氯苯丙氨酸(PCPA)致大鼠失眠模型,研究半夏秫米汤(BXSMD)的治疗作用及可能机制,并对其质量控制及安全性进行初步探究,从而为其临床安全合理用药提供实验依据。方法:(1)安全性评价:预实验结果显示,BXSMD以最大浓度(9 g/m L)、最大容积(0.3 m L/10g体质量)1次灌胃给予小鼠,不足引起死亡,测不出LD50,故测定最大给药量。小鼠随机分为2组,每组20只,以BXSMD最大浓度、最大容积1日内灌胃给予2次、3次后,连续观察14 d,记录动物反应情况。不引起小鼠死亡的剂量即为最大给药量,计算相当于临床日用药量的倍数,初步评价BXSMD的安全性。(2)BXSMD的质量控制:测定BXSMD中5个主要成分(腺苷、鸟苷、尿苷、腺嘌呤、胞苷等)的含量,为药物提供质量控制。(3)模型的制备、分组及给药:SD雄性大鼠通过腹腔注射PCPA混悬液复制失眠模型,检测睡眠潜伏期和睡眠持续时间判断模型成功与否。将造模成功的大鼠随机分为5组:模型组、BXSMD低、中、高剂量组(8.1、16.2、32.4 g/kg)、阳性对照组(地西泮组,0.9 mg/kg)。每日灌服一次,连续给药7 d。(4)BXSMD对PCPA致失眠大鼠模型的治疗作用及机制研究:每日观察大鼠的精神状态、皮毛色泽、粪便颜色等,并测定大鼠体质量。药物干预7 d后,戊巴比妥钠睡眠协同实验检测各组大鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间;旷场实验记录各组大鼠自发活动情况,并反应焦虑状态、紧张度等情况;水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力;HE染色法观察各组大鼠下丘脑中神经元形态变化;ELISA法检测大鼠下丘脑中5-HT、GLU、GABA、AC、c AMP含量;免疫组化法检测大鼠下丘脑中GAD67蛋白的表达情况;Western-Blot法检测大鼠下丘脑中5-HT1AR、5-HT2AR、PKA、BDNF蛋白表达水平及CREB磷酸化水平。结果:1.BXSMD安全性评价:小鼠最大给药量为810 g/kg,相当于人临床日用量的315倍(人临床日用量2.57 g/kg),提示BXSMD无明显急性毒性,安全范围较大。2.BXSMD的质量控制:采用HPLC法测定BXSMD中鸟苷、尿苷、胞苷、腺苷及腺嘌呤含量,含量从高到低依次为鸟苷、尿苷、腺苷、腺嘌呤、胞苷。3.BXSMD对失眠模型大鼠的治疗作用:与正常对照组比较,模型组大鼠毛发粗糙无光泽,粪便灰白色,早期出现易激惹、攻击行为,随着时间延长,呈现出精神疲惫、萎靡,体质量明显增长缓慢(P<0.01)等一般情况,睡眠潜伏期明显延长和睡眠持续时间明显缩短(P<0.01),总活动距离、平均速度、中央格跨格次数均明显减少(P<0.01),静止时间、粪便粒数明显增加(P<0.01,P<0.05),逃避潜伏期时间和游泳总路程明显增加(P<0.01)、目标象限停留时间和进入次数明显减少(P<0.01,P<0.05),大鼠下丘脑神经元表现为染色变深,细胞大小不一、细胞形状变长、部分细胞核可见皱缩;BXSMD干预后大鼠精神状况均得到不同程度的改善,毛发相对润泽,体质量明显增加(P<0.05),睡眠潜伏期明显缩短和睡眠持续时间明显延长(P<0.01),总活动距离、平均速度、中央格跨格次数明显增加(P<0.01),静止时间、粪便粒数明显减少(P<0.01,P<0.05),逃避潜伏期时间和游泳总路程明显减少(P<0.01),目标象限停留时间和进入次数均明显增加(P<0.01,P<0.05)。大鼠下丘脑神经元病理变化得到不同程度的改善。4.ELISA法检测结果显示:与正常对照组比较,模型组下丘脑中5-HT、GABA、AC、c AMP的含量明显减少(P<0.01),GLU含量明显增多(P<0.01),GLU/GABA比值显著上升(P<0.01);BXSMD干预后,5-HT、GABA、AC、c AMP的含量均有所增多,GLU含量明显减少(P<0.05),且具有一定的剂量依赖性。5.免疫组化法检测结果显示:与正常对照组比较,模型组大鼠下丘脑中GAD67蛋白的表达量明显减少(P<0.01),经BXSMD干预后,GAD67蛋白的表达有所上调,且具有一定的剂量依赖性。6.Western-Blot法检测结果显示:与正常对照组比较,模型组大鼠下丘脑中5-HT1AR、PKA、BDNF蛋白的表达水平及CREB磷酸化水平均明显降低(P<0.05),5-HT2AR蛋白表达水平稍有升高,但无统计学意义(P>0.05)。经BXSMD干预后,5-HT1AR、PKA、BDNF蛋白的表达水平及CREB磷酸化水平较模型组均明显增高(P<0.05或P<0.01),且具有一定的剂量依赖性。结论:BXSMD安全范围较大,对失眠模型大鼠有较好的治疗作用,并可改善模型大鼠的焦虑紧张度和学习记忆能力,其作用与调节GLU/GABA递质失衡、调控5-HT及其1A受体介导的c AMP/PKA信号通路有关。鸟苷、尿苷、腺苷、腺嘌呤、胞苷可做为BXSMD的质控指标。