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目的:1.观察针、灸不同刺激方式对小鼠足三里、大椎、关元不同穴区启动物质差异的影响,如:肥大细胞、5-羟色胺、组胺、降钙素基因相关肽以及P物质差异的影响。2.观察TRPV1是否参与了针、灸的局部启动过程,以及不同刺激手段对局部启动物质影响有何差异3.分析TRPV1是否是介导针灸调节胃运动中枢响应的重要物质,而针、灸不同干预手段对中枢响应的影响有何不同。方法:1.雄性C57BL/6小鼠随机分为空白足三里、空白大椎组、空白关元组、针刺足三里组、针刺大椎组,针刺关元组、热灸足三里组、热灸大椎组,热灸关元组;雄性TRPV1基因敲除小鼠随机分为正常组、针刺足三里组、热灸足三里组,适应性喂养一周后进行试验,采用针灸针,给予C57BL/6针刺组与TRPV1-/-针刺组,手针刺激;采用热灸仪,给予C57BL/6热灸组与TRPV1-/-热灸组,温热刺激。2.甲苯胺蓝染色法观察穴区皮肤中肥大细胞的表达,免疫荧光染色法观察穴区皮肤化学物质(HA、5-HT、CGRP、SP)的表达。3.采用ELISA和WB检测局部穴区组织中肥大细胞、HA、5-HT、CGRP、SP、VR1的蛋白含量和脑皮质中GSH-R和5-HT1A、5-HT2C、5-HT3、5-HT4、5-HT7蛋白的表达。结果:1.针、灸都可以引起肥大细胞计数增多,与空白组对比,针刺足三里、大椎、关元可使穴区肥大细胞数量增多(P<0.01,P<0.05,P<0.05),热灸足三里、大椎、关元可使穴区肥大细胞明显增多(P<0.01,P<0.05,P<0.05);热灸足三里组多于针刺足三里组(P<0.05)。针刺后HA和5-HT主要分布于皮下组织中以局部聚集为主要形式,而热灸后HA和5-HT广泛分布于表皮之中。与空白对比,针刺足三里、大椎、关元可以导致穴区HA和5-HT含量上升(P<0.05),热灸足三里、大椎、关元也可引起穴区HA和5-HT含量上升(P<0.01,P<0.05,P<0.05);针刺足三里5-HT含量表达明显优于针刺大椎和关元组(P<0.01),热灸足三里组,也优于热灸大椎和关元组(P<0.01),差异具有统计学意义。CGRP和SP位于神经纤维末端呈条状,在真皮下和皮下组织中分布。与空白组对比,针刺足三里、大椎、关元组可以引起CGRP表达上升(P<0.05,P<0.05,P<0.01),热灸也可以引起足三里、关元CGRP表达上升(P<0.05);针刺足三里优于热灸足三里组(P<0.05)差异具有统计学意义。皮肤中的VR1主要分布真皮和毛囊周围,与空白足三里组对比,针刺和热灸足三里组可使穴区VR1阳性神经纤维表达明显增多(P<0.05,P<0.001),热灸组优于针刺组(P<0.01)差异具有统计学意义;与空白大椎和关元组对比,针刺和热灸大椎、关元可引起VR1含量明显增多(P<0.05,P<0.01),热灸组优于针刺组(P<0.05)差异具有统计学意义;空白足三里VR1含量优于大椎和关元组(P<0.05),针刺足三里含量高于针刺关元组(P<0.05)。2.与TRPV1-/-空白组对比,TRPV1-/-针刺组肥大细胞计数和脱颗粒数增多(P<0.05);TRPV1基因敲除小鼠针刺与热灸组肥大细胞计数均低于C57BL/6野生型小鼠针刺组与热灸组(P<0.05,P<0.01),差异具有统计学意义;脱颗粒数情况也基本与肥大细胞计数情况一致。与空白组相比,针刺组与热灸组HA和5-HT表达明显增多,并大量向血管和毛囊周围聚集,与TRPV1-/-空白组对比,TRPV1-/-针刺组表达增多(P<0.05);TRPV1-/-热灸组HA表达明显低于C57BL/6热灸组(P<0.01);TRPV1-/-针刺组5-HT表达低于C57BL/6针刺组(P<0.05),而TRPV1-/-热灸组5-HT表达显著低于C57BL/6热灸组(P<0.01)与C57BL/6针刺组对比,TRPV1-/-针刺组CGRP阳性神经纤维表达减少(P<0.05);与C57BL/6热灸组对比,TRPV1-/热灸组CGRP和SP含量下降(P<0.05)。3.与C57BL/6空白组相比,针刺可以引起GHS-R含量明显降低(P<0.05),5-HT1A的含量明显降低(P<0.05),5-HT2C含量明显降低(P<0.05),5-HT3含量明显降低(P<0.05),C57BL/6针刺组5-HT7的含量明显降低(p<0.05);热灸则可导致GHS-R含量明显降低(P<0.05),5-HT3含量明显降低(P<0.05),5-HT7含量明显降低(P<0.05);差异具有统计学意义。与TRPV1-/-空白组对比,TRPV1-/-针刺组引起5-HT1A的含量明显降低(P<0.05),TRPV1-/-热灸组导致5-HT4含量下降(P<0.05),差异具有统计学意义。结论:1.针、灸对穴区肥大细胞和伤害性神经肽影响存在差异,灸对肥大细胞脱颗粒影响大于针,针对伤害性神经肽的影响强于灸。2.不同穴位穴区皮肤组织中肥大细胞和伤害性神经肽分布具有差异,与大椎和关元穴相比,足三里穴区生物活性物质更多,且更易被针灸刺激激活。3.TRPV1感受器参与了针、灸的启动过程,介导灸的启动效应强于针,说明针法的启动效应还有其它感受器的存在。4.TRPV1介导了针灸调节胃运动的中枢响应过程,但是两者所影响的神经递质存在差异。