H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在包括我国在内的东南亚及世界许多国家分布广泛,中国大陆1994年首次公开报道从鸡群中分离到H9亚型AIV,随后便在一些地区形成小规模的流行,未波及全国。但1998年春夏开始的H9亚型禽流感在短短的几个月时间内就形成波及20多个省区的全国范围大流行,给我国的养禽业造成了巨大的经济损失。1998年以来我国发生的H9N2亚型AI传播效率高、速度快和范围广,1999年又从人类病毒中分离出H9N2亚型AIV,对于它存在的潜在危害已经越来越多的受到关注。为了解影响AIV传播效率的分子机制,本研究选择于2001年自中国上海某鸡场分离的两株H9N2亚型AIV:A/Chicken/Shang hai/7/2001 (H9N2)(简称62株)、A/Chicken/Shanghai/14/2001 (H9 N2)(简称70株)作为研究对象,比较了它们的传播途径特性和致病性,发现62株可以经直接接触和气溶胶途径传播,也能通过粪便接触传播,而70株只经直接接触途径传播。有研究表明NA基因可能是影响H9N2亚型AIV经气溶胶传播途径和传播效率的主要基因。因此本实验还就62株的NA基因进行序列测定和遗传进化分析。一、62株和70株传播途径特性和致病性的比较为研究H9N2亚型禽流感病毒的传播与复制特性,选用两株H9N2亚型AIV(A/Chicken/Shanghai/7/2001和A/Chicken/Shanghai/14/2001),分别进行动物传播途径特性实验推断其传播特性。将62株和70株经同一批10日龄SPF鸡胚复苏后,收集含病毒的尿囊液,经HA和HI实验证明是正确的毒株后,置于-70℃冰箱备用。接种前将种毒作1:10稀释后,按200μL/只的接种剂量,采用口服、滴鼻和气管接种的方法对4周龄的SPF鸡进行传播特性和致病性实验。对4周龄SPF鸡的致病性试验发现,62株对4周龄SPF鸡的致病力高于70株;62株在气管组织的病毒滴度和在消化道的复制水平皆比70株高,但62在消化道的复制能力又远远低于呼吸道的,70株尚未发现在消化道复制,证明62株和70株主要在呼吸道复制,62株比70株复制能力强。通过在4周龄SPF鸡的传播途径特性实验,发现62株和70株在直接接触,气溶胶传播和粪便接触3种传播途径存在差异:62株可以通过直接接触、气溶胶传播途径传播,也能通过粪便接触传播;70株仅仅通过直接接触传播。在直接接触传播特性上,62株和70株的传播效率相似,但62株的传播力度要强于70株的。通过对接种鸡和未接种鸡的HI试验,结果进一步证实了,62株可以经气溶胶途径传播,70株不能经气溶胶途径传播。二、H9N2亚型禽感病毒62株的NA基因的序列测定和遗传进化分析选择H9N2亚型上海分离株A/Chicken/Shanghai/7/2001(简称62株),根据Hoff- mann通用引物,设计扩增基因的引物对,提取基因组RNA,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NA片段并测序。将本实验所获得的62株的NA基因序列与GenBank中17株H9N2亚型流感病毒(包括GenBank中已经发表的62株的NA基因序列和70株的序列)的NA序列进行比较和遗传进化分析。62株与70株的NA基因同源性是97.7%,与CK/BJ/1/94和CK/HK/G9/97都在同一分支。除去GenBank中62株的NA基因序列外,与62株同源性最高的是CK/SH/2/2001,同源性是99.8%,与CK/BJ/1/94的序列同源性是94.4%,与Q/HK/G1/97的同源性是89.9%,与人源H9N2亚型毒株HK/1073/99的同源性是90.4%,与HK/1074/99的同源性是89.9%。62株与17株H9N2亚型流感病毒的NA序列同源性范围是86.3%-99.9%,同源性最低的是与DK/HK/Y439/97,同源性为86.3%。与自1999年到2002年间上海地区分离的另外9株H9N2亚型禽流感病毒NA基因同源性较高,范围为94.4%-99.8%,说明它们之间在遗传演化地位上关系密切,同属于H9N2亚型AIV欧亚分支中的类C/BJ/1/94亚分,可能来源于C/BJ/1/94和CK/HK/G9/97。