干扰素诱导跨膜蛋白5(interferon induced transmembrane protein5, IFITM5)是干扰素诱导跨膜蛋白家族成员之一，具有促进成骨细胞矿化的作用。在成骨细胞分化阶段表达量增加，尤其是骨基质形成期和矿化阶段达到峰值。Ⅴ型成骨不全患者中均发现存在IFITM5基因的5’UTR的c.-14C> T突变，该类患者临床特征主要是前臂骨间膜钙化和增生性骨痂形成。microRNA(miRNA)是一类长度21-23个核苷酸，广泛存在于多物种的内源性、非编码单链RNA，在转录后水平调控基因的表达。己证实miRNA广泛参与了多种生理病理过程，如细胞增殖、分化、凋亡。研究表明miRNA可靶向调控成骨细胞分化过程中的关键基因以调控成骨细胞的分化。但是，到目前为止，还没有生物学证据发现靶向调控成骨细胞矿化相关基因IFITM5的miRNA，从而调控成骨细胞的矿化。目的：本研究旨在发现靶向调控IFITM5基因的microRNA，并验证microRNA对成骨细胞矿化、分化的影响。方法：应用TargetScan、miRanda、Microcosm和DIANA-microT等4个靶标预测软件中至少两个预测结果的交集来判定microRNA和IFITM5是否存在靶标关系。人工合成microRNA mimics，并构建野生型、突变型pmirGLO-IFITM5-3’UTR双荧光素酶报告载体，通过FuGENE HD转染Saos-2细胞，检测萤火虫荧光素酶相对活性以筛选出结合于IFITM5-3’UTR的microRNA，进一步通过Western blotting检测筛选出显著下调IFITM5蛋白的microRNA。最终筛选出的microRNA转染Saos-2细胞后，诱导矿化后采用茜素红染色法观察矿化结节的形成，并应用实时荧光定量PCR检测分化标志蛋白ALP、OCN、Runx2等基因的表达。结果：(1)生物信息学预测出28个相关microRNA，其中15个为三个及以上数据库共有。(2)通过野生型双荧光素酶报告载体与microRNA mimics共转染Saos-2细胞，以实验组荧光值相对于对照组下调30%以上为原则，筛选出miR-1296、miR-2861、miR-4316、miR-661、miR-762；构建上述五个突变型双荧光素酶报告载分别与各自microRNA mimics共转染Saos-2细胞，筛选出miR-2861、miR-4316、miR-762。(3)将上述三个microRNA转染到Saos-2细胞，Western blotting结果显示miR-762、miR-4316显著降低IFITM5蛋白表达水平。(4)茜素红染色实验发现，相对于空白对照组，在诱导矿化72h后miR-762组均抑制矿化结节的形成；实时荧光定量PCR检测矿化标志蛋白ALP、OCN、Runx2，相比于对照组，miR-762组ALP、OCN、Runx2的mRNA表达量均下降。结论：筛选出负向调控IFITM5的miR-762、miR-4316，并验证了miR-762抑制成骨细胞矿化的作用。