论文部分内容阅读
第一部分miR-SNP与结直肠癌易感性及化疗疗效相关性研究【目的】探讨microRNA相关的SNP与结直肠癌发生的易感性和肿瘤临床病理学参数、化疗疗效的相关性。【方法】1、筛选microRNA相关的SNPs位点，并设计等位基因特异性引物；2、收集300例健康志愿者和175例结直肠癌患者的外周血，从中提取DNA；3、采用等位基因特异性扩增法（ASA）测定SNPs基因型；4、用统计学软件分析SNPs基因型与结直肠癌发生、肿瘤临床病理学参数及化疗疗效的相关性。【结果】（1）分析6个microRNA相关的SNPs位点基因型的结果表明：在结直肠癌患者和健康人群中，rs2910164、rs895819、rs7911488和rs2292832的等位基因及基因型分布频率存在显著统计学差异(P＜0.05)。其中，尤以rs7911488、rs2292832与结直肠癌发生的相关性最为突出，与rs7911488位点AA基因型相比，AG基因型（OR=0.406,95%CI=0.257-0.642）和G等位基因携带者（OR=0.469,95%CI=0.300-0.732）患结直肠癌的风险均更低；与rs2292832位点TT基因型相比，CT基因型（OR=8.786,95%CI=5.237-14.740）和C等位基因携带者（OR=4.452,95%CI=2.769-7.159）患结直肠癌的风险更高。而rs3746444、rs28599926的等位基因及基因型分布频率在结直肠癌和正常人群分布中的差异无统计学意义(P>0.05)。（2）rs3746444位点TT基因型和rs7911488位点AA基因型在低分化患者中的频率显著低于CT基因型（7.14%vs38.46%）和AG基因型（2.12%vs18.05%）。（3）rs7911488的基因型与化疗疗效反应相关（P=0.041），与AA基因型相比，AG基因型患者（OR=0.194，95%CI=0.045-0.842）和G等位基因携带者（OR=0.222，95%CI=0.053-0.940）化疗疗效更差；rs895819位点的基因型与化疗毒副反应几近相关（P=0.084），与TT基因型相比，CC基因型患者毒副反应更大（OR=3.469，95%CI=0.860-13.989）。其余SNPs位点的基因型与结直肠癌化疗疗效和毒副反应均未见显著相关性。【结论】SNP位点rs7911488和rs2292832与结直肠癌的发生显著相关，其G等位基因和T等位基因可能对结直肠癌发生起到保护作用。第二部分rs7911488对miR-1307表达水平及miR-1307对靶基因表达的影响【目的】研究rs7911488对miR-1307表达水平的影响和miR-1307对靶基因表达的影响。【方法】1、构建（CC和TT基因型）miR-1307表达载体，转染人胚肾细胞株HEK293t，采用实时荧光定量PCR法测定不同基因型miR-1307的表达；2、生物信息学软件预测miR-1307的靶基因；3、构建靶基因荧光素酶表达载体，将miRNA与构建好的载体共同转染CHO细胞，并用双荧光素酶报告系统检测基因活性；4、运用统计学软件分析rs7911488对miR-1307表达水平的影响以及miR-1307对靶基因调控作用的影响。【结果】（1）rs7911488位点CC基因型miR-1307表达水平较位点TT基因型明显上升（0.032vs0.006）。（2）预测的靶基因是RHOA、WNT4和TYMS基因。对于TYMS基因，不加miR-1307的细胞，荧光素酶的活性显著高于加入了miR-1307的细胞（P<0.05）。而对于RHOA、WNT4基因，不加miR-1307的细胞，荧光素酶的活性与加入了miR-1307的细胞无显著差异（P>0.05）。【结论】rs7911488位点CC基因型对miR-1307的表达有促进作用。TYMS基因表达受到miR-1307显著抑制。小结本论文通过对miR-SNP与结直肠癌易感性及化疗疗效的相关性研究，发现SNP位点rs7911488与结直肠癌易感性的发生相关，且G等位基因携带者患癌风险性更低。同时通过体外细胞功能实验发现，SNP位点rs7911488通过影响miR-1307的表达水平，进而影响与靶基因TYMS结合，改变了miRNA的调控功能，进而改变了TYMS基因表达水平，从而参与结直肠癌的耐药。这为寻找结直肠癌的遗传病因及阐明miR-SNP影响结直肠癌化疗药物耐药的机制提供了新的视角。