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脂肪移植的开展已有一百多年的历史。其在整形外科领域的地位尤显重要。由于其来源丰富、取材容易、操作简单、充盈外形好、无排异反应等优点,故多用于充填颜面部的凹陷畸形、隆颞、隆鼻和隆乳等整形美容手术中。但移植脂肪的成活率较低,一般为30%-60%。主要原因是移植的脂肪组织未能及时、有效地与受区建立血供,从而导致移植的脂肪组织缺血、坏死及吸收。故如何加速移植体的血供建立成为当今脂肪组织移植中研究的热点。目的:本实验通过建立大鼠的脂肪移植模型,在大鼠自体的脂肪颗粒中加VEGF与bFGF的复合体。利用VEGF与bFGF的促进血管生长,加速局部血液循环重建的作用,研究其对移植体内早期血管生成的影响,及其对移植游离脂肪成活率的影响。方法:采用Wistar大鼠50只,随机分为5组。生理盐水对照组10只,第二实验组VEGF组10只,第三实验组bFGF组10只,第四实验组VEGF、 bFGF联合处理组10只,(与空白组和VEGF、 bFGF联合处理组相对比)加了另一对照组即小剂量VEGF+bFGF联合处理10只。取出腹部大网膜脂肪总量约2.0g,脂肪块用显微剪剪碎成细小颗粒状,约1-2mm,用20m1注射器洗净,其他组游离脂肪制备同上。翻转大鼠,在背部作一皮肤纵行小切口,将脂肪颗粒注射到已背部腔隙内,缝合背部切口。五组中在每组中分别随机抽取均5只wistar大鼠,于术后15、30天取材。可见脂肪移植体呈暗黄色,被一层纤维组织包膜包绕,界线明显。去除移植体的外周包膜后,将取出的脂肪移植体放入精密测量天平秤移植体的重量,读取并记录数据。10%甲醛固定后进行常规石蜡包埋,切片,做CD34免疫组化染色备用。结果:1.对比VEGF+bFGF(各0.1μg)的脂肪颗粒移植组和各对照组残余重量:15天移植物残余矫正重量统计分析,t检验进行组间比较.实验组与空白对照组比较P<0.05,两组间有明显差异。实验组与VEGF组比较F=2.25,P=0.03,P<0.05,两组间有明显差异。实验组与bFGF组比较F=1.68,P=0.03,P<0.05,两组间有明显差异。bFGF与VEGF组比较F=1.23,P=0.86,P>0.05,两组间无明显差异。bFGF与VEGF组较其他组有明显的脂肪成活。30天移植物残余矫正重量统计分析,实验组与空白对照组比较P<0.05,两组间有明显差异。实验组与VEGF组比较F=1.12,P=0.03,P<0.05,两组间有明显差异。实验组与bFGF组比较F=2.85,P=0.04,P<0.05,两组间有明显差异。bFGF与VEGF组比较F=2.54,P=0.56,P>0.05,两组间无明显差异。bFGF与VEGF组较其他组有明显的脂肪成活。2. VEGF+bFGF(各0.1μg)的脂肪颗粒移植组和各对照组的CD34(×400)染色对比:脂肪移植后30天的CD34染色,VEGF+bFGF(各0.1μg)处理的脂肪颗粒移植组(图12)和对照组(图9)之间的染色血管内皮细胞数有明显差异,VEGF+bFGF(各0.1μg)处理的脂肪颗粒移植组(图12)阳性染色较多,而VEGF+bFGF(各0.1μ g)处理的脂肪颗粒移植组(图21)较VEGF+bFGF(各0.05μ g)处理的脂肪颗粒移植组(图22)阳性染色数略高。3. VEGF+bFGF(各0.1μ g)的脂肪颗粒移植组和各对照组的CD34(×400)染色平均微血管密度的对比:30天移植物微血管计数分析,实验组与空白对照组比较F=1.16,P<0.05,两组间有明显差异。实验组与VEGF组比较F=2.18,P<0.05,两组间有明显差异。实验组与bFGF组比较F=2.47,P<0.05,两组间有明显差异。bFGF与VEGF组比较F=1.13,P=0.81,P>0.05,两组间无明显差异。4.不同VEGF+bFGF剂量的脂肪颗粒移植后残余重量的对比:15天移植物残余矫正重量统计分析,t检验进行组间比较.两组与空白对照组比较P<0.05,两组间有明显差异。小剂量组与空白组比较P<0.05,两组间有明显差异。大剂量组与空白组比较P<0.05,两组间有明显差异小剂量组与大剂量组比较P<0.05,两组间有明显差异。30天移植物残余矫正重量统计分析,两组与空白对照组比较P<0.05,两组间有明显差异。小剂量组与空白组比较P<0.05,两组间有明显差异。大剂量组与空白组比较P<0.05,两组间有明显差异小剂量组与大剂量组比较P<0.05,两组间有明显差异。5.不同剂量VEGF+bFGF脂肪颗粒移植组的CD34(×400)染色平均微血管密度的关系:30天移植物微血管计数分析,小剂量组和大剂量组与空白对照组比较P<0.05,两组间有明显差异。大剂量组与小剂量组比较P<0.05,两组间有明显差异。结论:(1)建立有效的新生血管模型,新鲜分离的间质血管可有效的诱导新生血管的形成。大网膜作为脂肪移植的来源,是因为大网膜有密集毛细血管的构筑,能改善缺血器官的血液供应,能在两种结构之间迅速发生血管连接,德国Liebermann Meffert认为大网膜与脾同起源于胃后壁的同一区域,它们都具有吞噬作用和新生毛细血管形成的机能。在临床应用的前瞻性上,随着微创技术的发展,为人体脂肪填充在临床的应用提供了很好的思路。(2)对自身脂肪移植血管生物学研究表明,一些细胞因子在改善缺血组织存活率方面扮演了重要的角色,其中VEGF是强有力的直接血管诱导因子,为血管生成初期最重要的促进因子,具高度保守性,刺激体外培养的内皮细胞迁移,诱导体内血管形成,维护血管正常状态,增加血管内皮的通透性,在新生血管形成过程中起重要作用。而bFGF可以弥补VEGF这方面的不足,它可以促进构成血管的主要成分细胞如成纤维细胞、平滑肌细胞和血管内皮细胞等增值,而且达到协调生长的效果。本实验利用具有广泛前景的脂肪移植实验模型,联合应用VEGF与bFGF来研究脂肪组织的血运重建,目的在于探索一种新的提高移植脂肪组织存活率的新方法。VEGF与bFGF复合对移植的脂肪有促进其血管生长的作用,提高了脂肪移植的成活率。(3)联合应用VEGF与bFGF来研究脂肪组织的血运重建,VEGF+bFGF(各O.1μ g)的脂肪颗粒移植组比小剂量组在促进脂肪生长的作用更显著,在掌握剂量上为临床的应用提供了借鉴。