【摘 要】
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目的:本文通过分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者血清中的lncRNAs和mRNAs的差异表达,进一步研究其在目的细胞中的功能,初步探讨lncRNAs在RA发生发展中的作用。方法:基于基因芯片技术,对RA患者和健康对照者混合血清中lncRNAs与mRNAs差异表达进行初步筛选,并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术进行验证。通过相关性分析、ROC曲线及lo
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目的:本文通过分析类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者血清中的lncRNAs和mRNAs的差异表达,进一步研究其在目的细胞中的功能,初步探讨lncRNAs在RA发生发展中的作用。方法:基于基因芯片技术,对RA患者和健康对照者混合血清中lncRNAs与mRNAs差异表达进行初步筛选,并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术进行验证。通过相关性分析、ROC曲线及logistic回归分析lncRNAs的异常表达与实验室指标之间的关系。进行lncRNA-mRNA的Gene Ontology（GO）和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes（KEGG）通路分析,并构建lncRNA与mRNA的共表达网络。对GEO数据库中的2个数据集:GSE101193,GSE94519利用R语言进行数据挖掘,并与所验证的两个lncRNAs取交集。培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）,并构建过表达lncRNA XR 428141.1重组慢病毒。通过慢病毒感染RA-FLS,研究lncRNA XR 428141.1过表达对RA-FLS增殖、侵袭及凋亡功能的影响。结果:1.通过基因芯片技术分析有差异表达的lncRNAs,结果显示,在RA患者血清中有1693个lncRNAs与1541个mRNAs有显著性差异表达。经qRTPCR验证,lncRNA XR＿428141.1在RA患者血清中表达上调（P=0.0075）,lncRNA ENST00000478103.2表达下调（P=0.0023）,与芯片结果一致。在RA组中,lncRNA XR＿428141.1和ENST00000478103.2的ROC（AUC）分别为0.872和0.837。相关性分析显示,lncRNA XR＿428141.1与RF和抗CCP抗体呈正相关,lncRNA ENST00000478103.2与RF和抗CCP抗体呈负相关。二元logistic回归分析表明,lncRNA XR＿428141.1可以作为RA的预测因子,风险比率为1.941,95%置信区间为1.140-3.305,模型的拟合度为93.1%。2.根据GO和KEGG pathway分析,显示376个上调lncRNAs参与了1455项生物学过程、284项分子功能、253项细胞组成;KEGG通路分析发现,这些lncRNA可能主要在信号转导、免疫疾病、代谢、免疫系统和内分泌系统通路中发挥作用。LncRNA XR＿428241.1和ENST00000478103.2与mRNA SNX21和UNC93B1具有共表达关系。根据GEO数据库中的2个数据集:GSE101193,GSE94519的挖掘分析,进行两次取交集验证,发现lncRNA XR＿428141.1和ENST00000478103.2与2个数据集并没有交集。3.Transwell细胞侵袭实验结果显示:与对照组相比,过表达lncRNA XR＿428141.1能够明显促进RA-FLS的侵袭。CCK-8实验结果显示,lncRNA XR＿428141.1可进一步促进RA-FLS的增殖。细胞凋亡实验表明lncRNA XR＿428141.1可能有抑制RA-FLS凋亡的功能。结论:lncRNA XR＿428141水平在RA患者血清中明显升高,过表达lncRNA XR＿428141影响RA-FLS细胞的侵袭、增殖和凋亡功能,提示lncRNA XR＿428141对RA患者的临床诊断具有潜在的应用价值;并在RA的发生发展中发挥一定作用。
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