【摘 要】
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为探索快速生长期马鹿（Cervus elphus）鹿茸生长点茸皮中新发现的低拷贝microRNA PC-3P-18485（简称miRNA 18485）的生物学功能。本研究利用生物信息学工具Target Scan预测miRNA 18485的靶基因,发现了跨物种保守性良好的靶基因DHDDS（Dehydrodolichyl Diphosphate Synthase Subunit）。DHDDS蛋白与Ng
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（NO.31671283）；
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为探索快速生长期马鹿（Cervus elphus）鹿茸生长点茸皮中新发现的低拷贝microRNA PC-3P-18485（简称miRNA 18485）的生物学功能。本研究利用生物信息学工具Target Scan预测miRNA 18485的靶基因,发现了跨物种保守性良好的靶基因DHDDS（Dehydrodolichyl Diphosphate Synthase Subunit）。DHDDS蛋白与Ng BR组成顺式异戊二烯转移酶（hCIT）,hCIT可催化Dolichol（多萜醇）从头生物合成途径中的链延伸阶段,Dolichol则是用于N-连接糖基化、O-甘露糖基化和GPI锚生物合成的聚糖的专门载体,对细胞的基本生理活动十分重要。本研究利用psiCHECK-2载体构建DHDDS 3’UTR的野生型和突变型重组载体,并于293T和MG63细胞系中进行双荧光素酶报告实验和Western blot实验,结果表明miRNA 18485特异性靶向DHDDS 3’UTR。利用生物信息学分析工具BLAST将miRNA18485序列与人类基因组数据库进行比对,BLAST结果表明人类中不含有马鹿中新发现的miRNA 18485。进而在MG63和Huh-7细胞系中进行miRNA 18485转化研究（translational research）的初步探索,通过细胞增殖和迁移实验方法验证马鹿miRNA18485于人骨肉瘤细胞MG63和人肝癌细胞Huh-7的异源调控作用,结果表明miRNA18485具有显著促进人MG63细胞增殖和Huh-7细胞迁移的作用。研究表明:miRNA 18485负调控DHDDS基因的表达机制具有进化保守性;miRNA18485能够特异性靶向DHDDS基因3’UTR,负调控内源DHDDS基因的表达;miRNA18485具有显著促进病理状态细胞增殖和迁移的生物学功能。这为microRNA PC-3P-18485的作用机理和功能研究提供一定的理论基础,为miRNA 18485的基础研究成果转化为实际患者的疾病预防、诊断治疗及预后评估进行了初步探索。
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