hsacirc0005273在膀胱尿路上皮癌进展中的作用及机制

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目的:随着基因高通量测序的应用不断广泛,通过基因数据库分析肿瘤相关基因并对其进行深入的研究也在快速发展中。本研究欲通过对已发表文献中相关高通量测序结果进行筛选来发现膀胱癌组织及癌旁正常组织中差异表达的circRNAs,进而探索与膀胱癌的发生、进展具有相关性的circRNAs;对筛选获得的具有表达差异的基因hsacirc0005273在膀胱癌患者肿瘤组织及正常膀胱粘膜组织中进行验证,并对其与膀胱癌患者临床病理相关指标及预后的相关性进行分析;此外通过体外细胞实验进一步阐明hsacirc0005273在膀胱癌发生、进展中的作用,并对潜在相关的分子机制进行探讨。方法:通过对已有circRNAs基因芯片结果进行分析筛选膀胱癌组织与癌旁正常组织差异表达的circRNAs谱,再通过患者的知情同意以及天津医科大学第二医院伦理委员会的批准收集30例临床患者组织标本之后,采用qRT-PCR的方法在30例膀胱癌组织及癌旁正常组织中进行hsacirc0005273差异表达情况验证。采用ROC曲线分析hsacirc0005273表达水平对膀胱癌患者预后的诊断价值并确定其表达量的cut-off值用以后续分析研究。通过卡方检验分析hsacirc0005273的表达量与膀胱癌患者临床、病理资料的相关性,通过KaplanMeier生存曲线分析及Log-rank检验hsacirc0005273的表达量与入组膀胱癌患者5年生存率的关系;进行体外实验时,先利用qRT-PCR评测不同膀胱癌细胞系中hsacirc0005273的表达量高低差异,通过构建hsacirc0005273过表达质粒促使其在膀胱癌细胞系中的过量表达,之后采用MTT及克隆形成实验检测hsacirc0005273过表达后对膀胱癌细胞增殖能力的影响,再通过细胞划痕实验和transwell侵袭实验检测hsacirc0005273过表达后对膀胱癌细胞迁移、侵袭能力的影响。结果:已表达文章中circRNAs基因芯片结果显示膀胱癌组织及癌旁正常组织存在表达的差异,其中我们通过qRT-PCR验证了hsacirc0005273在膀胱癌组织中的表达量较癌旁正常组织明显增高,且在基层浸润与非肌层浸润膀胱癌组织中的表达存在明显差异,与其他临床资料显示出较少的相关性,Kaplan-Meier生存分析显示hsacirc0005273高表达组患者5年生存率较hsacirc0005273低表达组明显降低;MTT与克隆形成实验证实hsacirc0005273的高表达与膀胱癌细胞的增殖能力无明显相关性,细胞划痕实验证实hsacirc0005273过表达能够增强膀胱癌细胞的迁移能力,transwell侵袭实验证实hsacirc0005273过表达能够增强膀胱癌细胞的侵袭能力。结论:hsacirc0005273在膀胱癌组织中较癌旁正常组织明显高表达,而hsacirc0005273的表达增高可提示膀胱癌患者预后不良,hsacirc0005273与膀胱癌细胞的增殖能力无显著相关性,而与膀胱癌细胞的侵袭迁移能力有关。
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