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目的:去甲肾上腺素转运体(NET)通过重吸收释放的去甲肾上腺素(NA)来终止突触传导,因此它在肾上腺素的神经传递的微调中发挥着重要的作用。为了阐明NET的表达规律,我主要研究NET基因(SLC6A2)5端的结构和功能,探讨人类去甲肾上腺素转运体基因5端基因特性。 方法:从含有人类NET基因中的细菌人工染色体(BAC)中克隆分离出含有启动子区域的DNA,并且将其连接到携带生物荧光素酶(LUC)基因的质粒中,将这些质粒瞬时转染进细胞中培养后进行报告基因分析。数据分析用内参pRL-TK校准的pPG_Basic的生物荧光素酶活性的平均值±标准误来表示。对于缺少血清的实验组,细胞转染24 h后,将细胞培养液换成不含血清的培养液再培养24 h,之后,细胞提取物被用来测量生物荧光素酶活性。 结果:NET基因5端缺失的克隆子证明了核心启动子出现在转录开始区域(+1)上游433个碱基处,沉默子出现在-2048~-434区域,增强子出现在-7699~-2089区域。另外,删除第一内含子区域导致生物荧光素酶活性的增强说明了这一区域存在转录或者负调节剪接的沉默子元件,这可能是因为这一区域的可变启动子。去除细胞培养液中的血清导致了转染了NET小基因片段的SK-N-AS细胞内NET表达的增加,但是在CHO细胞内缺没有这一现象。 结论:这些结果说明了NET基因5端的一些作用元件通过转录和后转录机制来调节NET在不同类型细胞系中特定地表达NET。